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Thi1, uma proteína envolvida na síntese de tiamina em Arabidopsis thaliana:: análises estruturais do mutante Thi1 (A140V) (2011)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: GARCIA, ASSUERO FARIA - IFSC
  • USP Schools: IFSC
  • Sigla do Departamento: FCM
  • Subjects: PROTEÍNAS; MUTAÇÃO; FLUORESCÊNCIA
  • Language: Português
  • Abstract: A forma ativa da vitamina B1, tiamina pirofosfato (TPP), é um cofator indispensável para certas enzimas que atuam no metabolismo de carboidratos e aminoácidos. Sua biossíntese se dá pela formação independente de suas partes componentes pirimidina e tiazol. Em procariotos a via de síntese para vitamina B1 já foi esclarecida, entretanto em eucariotos ainda existem ainda algumas lacunas a serem preenchidas. Em Arabidopsis thaliana a proteína Thi1 é possivelmente a responsável pela síntese do motivo tiazólico, uma vez que um composto relacionado a TPP foi encontrado em sua estrutura. Neste trabalho, Thi1 e seu mutante natural Thi1(A140V), o qual é responsável pela auxotrofia para tiamina numa linhagem mutante de A. thaliana, foram estudados com intuito de verificar a influência da mutação pontual na estrutura e na atividade de Thi1. As proteínas foram produzidas em E. coli e análises biofísicas usando anisotropia de fluorescência e Dicroísmo Circular (CD) mostraram diferenças consideráveis na estabilidade protéica. Estudos de desnaturação mostraram diferenças na temperatura de transição (Tm), de cerca de 4 'GRAUS'C maior para Thi1, e na concentração de guanidina na qual metade das proteínas estavam desnaturadas, de 0,42 M para Thi1 e 0,24 M para Thi1(A140V). Os dados de anisotropia de fluorescência obtidos a partir da desnaturação térmica também confirmaram a maior instabilidade de Thi1(A140V) frente a Thi1. Para avaliar a presença e caracterizar o provável precursor de TPP emThi1(A140V), foram também realizados ensaios de absorção, CD e infra-vermelho dos ligantes intrínnsecos. Os resultados destas análises mostraram que as moléculas poderiam apresentar diferenças em seus grupos constituintes. Entretanto, os experimentos complementares de Ressonância Magnética Nuclear (RMN 1D 'ANTPOT.1 H' e 2D TOCSY) revelaram que as diferençass observadas nas amostras dos ligantes, provenientes de Thi1 e de Thi1(A140V), tratavam-se na verdade de diferenças nas proporções de quatro populações distintas de compostos, compondo um pool de ligantes. Na amostra proveniente de Thi1(A140V), a população dominante correspondeu á  molécula de adenosina difosfato, ADP. Ainda, embora em ambas as amostras o ADT tenha sido encontrado, aquela derivada de Thi1(A140V) apresentou uma população significativamente menor deste composto. Concluindo, os resultados demonstraram que a mutação A140V levou a uma maior instabilidade conformacional em Thi1 e, além disso, a presença de quantidades reduzidas de ADT em Thi1(A140V) sugerem que esta alteração tenha contribução de alguma forma para a redução de sua atividade
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 12.08.2011
  • Acesso online ao documento

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    IFSC82002148Te2148
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    • ABNT

      GARCIA, Assuero Faria; ARAUJO, Ana Paula Ulian de. Thi1, uma proteína envolvida na síntese de tiamina em Arabidopsis thaliana:: análises estruturais do mutante Thi1 (A140V). 2011.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2011. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-04102011-161654/ >.
    • APA

      Garcia, A. F., & Araujo, A. P. U. de. (2011). Thi1, uma proteína envolvida na síntese de tiamina em Arabidopsis thaliana:: análises estruturais do mutante Thi1 (A140V). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-04102011-161654/
    • NLM

      Garcia AF, Araujo APU de. Thi1, uma proteína envolvida na síntese de tiamina em Arabidopsis thaliana:: análises estruturais do mutante Thi1 (A140V) [Internet]. 2011 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-04102011-161654/
    • Vancouver

      Garcia AF, Araujo APU de. Thi1, uma proteína envolvida na síntese de tiamina em Arabidopsis thaliana:: análises estruturais do mutante Thi1 (A140V) [Internet]. 2011 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-04102011-161654/