Ver registro no DEDALUS
Exportar registro bibliográfico

Análise de homoplasmia de plantas transplastômicas de fumo via PCR em tempo real (2012)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: TANAKA, SIMONE MISSAE - ESALQ
  • USP Schools: ESALQ
  • Sigla do Departamento: LCB
  • Subjects: CLOROPLASTOS; FUMO; GENOMAS; PLASTÍDEOS; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
  • Keywords: Transformação genética
  • Language: Português
  • Abstract: A transformação plastidial oferece uma série de vantagens em relação à transformação nuclear, como: altos níveis de expressão de proteínas, capacidade de expressar múltiplos transgenes em operons e contenção gênica pela ausência de transmissão pelo pólen. Devido ao alto número de cópias do genoma plastidial por cloroplasto e ao alto número de cloroplastos por células vegetais, são necessários ciclos de regeneração sob condições seletivas para obter transformantes homoplásmicos. A análise de homoplasmia é realizada pela metodologia de Southern blot ou pelo teste de herança do transgene pela germinação de sementes em meio seletivo. O Southern blot é trabalhoso, demorado e para maior sensibilidade envolve o uso de radioisótopos, enquanto o teste de germinação é realizado somente após a produção de sementes necessitando de um ciclo de reprodução da planta. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um método rápido, sensível e eficaz para determinar o grau de homoplasmia de plantas transplastômicas, baseado na técnica de PCR em tempo real. Folhas de fumo foram transformadas com vetores compostos pelos genes 9 dessaturase (pMR1), 15 dessaturase (pMR3), -3 elongase (pMR5) e 12/3 dessaturase (pMR10), todos contendo o gene de seleção aadA. No total, 44 plantas foram obtidas, sendo 21 plantas positivas para a inserção do transgene. O grau de homoplasmia foi determinado pela proporção entre o número de cópias do transgene e o número de cópias do gene endógeno. Inicialmente,misturas de DNA de plantas transplastômicas homoplásmicas (pMR1 e pMR3) com DNA de planta tipo selvagem foram preparadas para simular diferentes graus de homoplasmia. DNA da planta transplastômica ou do plasmídeo foi diluído em série para construção das curvaspadrão, com a quantidade dos genes sendo estimada por meio da plotagem nessas curvas. Os índices de homoplasmia detectados na PCR em tempo real foram compatíveis com os resultados do teste de germinação com valores abaixo de 1 para plantas heteroplásmicas, 1 para a planta homoplásmica e 0 para as plantas sem a inserção do transgene. Os resultados das análises de amostras coletadas após o primeiro ciclo de regeneração mostraram que 13 das 21 plantas já se apresentavam em estado homoplásmico não sendo necessários mais ciclos de regeneração. A PCR em tempo real mostrou ser um método eficiente para análise do grau de homoplasmia de plantas transplastômicas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 10.01.2012
  • Acesso online ao documento

    Online access or search this record in

    Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    ESABC10500122584t633.71 T161a e.2 102043
    How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      TANAKA, Simone Missae; CARRER, Helaine. Análise de homoplasmia de plantas transplastômicas de fumo via PCR em tempo real. 2012.Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2012. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11144/tde-07022012-161104/ >.
    • APA

      Tanaka, S. M., & Carrer, H. (2012). Análise de homoplasmia de plantas transplastômicas de fumo via PCR em tempo real. Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11144/tde-07022012-161104/
    • NLM

      Tanaka SM, Carrer H. Análise de homoplasmia de plantas transplastômicas de fumo via PCR em tempo real [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11144/tde-07022012-161104/
    • Vancouver

      Tanaka SM, Carrer H. Análise de homoplasmia de plantas transplastômicas de fumo via PCR em tempo real [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11144/tde-07022012-161104/

    Últimas obras dos mesmos autores vinculados com a USP cadastradas na BDPI: