Geração e Criopreservação de Embriões de Camundongos Imunodeficientes das Linhagens Nude e seus Híbridos Mutantes de Receptores da Família Toll (TLR) (2011)
- Authors:
- Autor USP: BELIZARIO, JOSE ERNESTO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FARMACOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Camundongos imunodeficientes atímicos das linhagens NUDE e seus híbridos são os animais mais comumente usados nos estudos de xenotransplantes e testes de novos fármacos para o tratamento de tumores humanos [1]. Neste estudo foram feitos cruzamentos de camundongos da linhagem C3H.Cg-Foxn1nu/HanUnib, com mutação no gene Fox1/Forkhead Box N1 (nu-/-) e camundongos C3H/HeJ, com mutação no gene Toll-4 (TLR4-/-) para estabelecimento de fundadores de uma colônia de animais homozigotos C3H/HeJ duplo mutantes. Os animais foram identificados através de técnicas de fenotipagem (ausência de timo e pelagem) e genotipagem (ensaio de PCR). Animais: C3H.Cg-Foxn1nu/HanUnib foram obtidos do Biotério CEMIB/UNICAMP e camundongos C3H/HeJ, C3H/Pas, BALB/c, C57/BL-6 e híbridos 129/BALB/c do Biotério de camundongos do Departamento de Imunologia do ICB. Os cruzamentos para a manutenção da colônia são feitos entre machos fenotipicamente compatíveis com C3H/HeJ NUDE (TLR4-/-) e fêmeas C3H/HeJ com pelo (TLR4+/-). Os animais são mantidos em gaioleiros ventilados à temperatura de 22-24oC. Ensaio de PCR: Amostras de DNA foram purificadas da calda dos camundongos utilizando o reagente TRIZOL (Invitrogen). Na reação de PCR foram usados os primers: 5’CAG TGG TCA GTG TGA TTG TGG 3’ and 5’TTC CTG GAT GAT GGC AGC 3’. Os produtos da reação foram submetidos à digestão com a enzima NlaIII (Hin1II) conforme descrito [2]. O padrão de separação das bandas foi verificado em gel de poliacrilamida 10%. Os resultados foram comparados entre dezoito animais da colônia, fenotipicamente compatíveis com animais C3H/HeJ/NUDE e animais de outras linhagens usados como controle.Os resultados mostraram claramente o aparecimento de uma banda próxima de 220 pb indicando que o produto de 270 pb foi cortado em dois produtos, um de 220 pb e outro de 50 pb (não visível no gel). Desta forma, foi possível identificar animais homozigotos (TLR-/-), heterozigotos (TLR+/-) e selvagens (gene sem mutação). Figura 1: Produtos gerados após clivagem com enzima NlaIII (Hin1II) em gel de poliacrilamida 10%. Amostras 1, 3 e 6: C3H/HeJ (+/-) Amostra 2: selvagem Amostra 4: C3H/HeJ (-/-) Amostra 5: C57BL/6 (selvagem) M: Marcador 100pb. A clivagem com a enzima NlaIII/Hin1II mostrou-se um método eficiente para seleção de camundongos TLR4 em heterozigose e homozigose. O cruzamento de machos sabidamente C3H/HeJ TLR -/- NUDE Foxn1 nu/nu (sem pelo) com fêmeas C3H/HeJ TLR-/- nu/+ (com pelo) por mais algumas gerações poderá estabelecer em definitivo as bases genéticas da colônia. Para o futuro, pretende-se padronizar e realizar a criopreservação de espermazóides e embriões dos camundongos a serem gerados nestes cruzamentos.
- Imprenta:
- Publisher: Universidade de São Paulo
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2011
- Conference titles: científica da USP (SIICUSP)
-
ABNT
SENA, Jaqueline O. e MASSIRONI, Silvia e BELIZÁRIO, José Ernesto. Geração e Criopreservação de Embriões de Camundongos Imunodeficientes das Linhagens Nude e seus Híbridos Mutantes de Receptores da Família Toll (TLR). 2011, Anais.. São Paulo: Universidade de São Paulo, 2011. . Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Sena, J. O., Massironi, S., & Belizário, J. E. (2011). Geração e Criopreservação de Embriões de Camundongos Imunodeficientes das Linhagens Nude e seus Híbridos Mutantes de Receptores da Família Toll (TLR). In . São Paulo: Universidade de São Paulo. -
NLM
Sena JO, Massironi S, Belizário JE. Geração e Criopreservação de Embriões de Camundongos Imunodeficientes das Linhagens Nude e seus Híbridos Mutantes de Receptores da Família Toll (TLR). 2011 ;[citado 2024 abr. 26 ] -
Vancouver
Sena JO, Massironi S, Belizário JE. Geração e Criopreservação de Embriões de Camundongos Imunodeficientes das Linhagens Nude e seus Híbridos Mutantes de Receptores da Família Toll (TLR). 2011 ;[citado 2024 abr. 26 ] - Análise da expressão do gene humano PIF/DCD em camundongos transgênicos
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