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Caracterização funcional e estrutural do sistema Tiorredoxina mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae (2012)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: NAKAMATSU, EDUARDO HIROSHI - IB
  • USP Schools: IB
  • Sigla do Departamento: BIO
  • Subjects: SACCHAROMYCES; MITOCÔNDRIAS; ESTRESSE OXIDATIVO; PROTEÍNAS
  • Keywords: Ensaios enzimáticos; Enzymatic assays; Estrutura; Mitochondria; Saccharomyces cerevisiae; Saccharomyces cerevisiae; Sistema tiorredoxina; Structure; Thioredoxin system
  • Language: Português
  • Abstract: NADPH, tiorredoxina e tioredoxina redutase compõem o sistema tiorredoxina, estão envolvidos na redução de ligações específicas de dissulfetos que desempenham um grande número de funções biológicas, tais como: síntese de DNA, defesa contra o estresse oxidativo, apoptose e sinalização redox. Tem sido demonstrado que as interações tioredoxina redutase-tiorredoxina são espécies específicas, sendo assim, investigamos aqui a especificidade dos substratos da tioredoxina redutase 2 mitocondrial (ScTrxR2) de Saccharomyces cerevisiae frente a outras tioredoxinas. ScTrxR2 especificamente reduziu as tiorredoxinas de levedura (tiorredoxina 1 = ScTrx1, tiorredoxina 2 = ScTrx2 e tiorredoxina = ScTrx3), mas não conseguiu reduzir a tiorredoxina de Homo sapiens e a de Escherichia coli. Além disso, ScTrxR2 exibiu eficiência catalítica semelhante para ScTrx3, que está localizado na mitocôndria e ScTrx1 e ScTrx2 que estão localizadas no citosol. Para compreender as características deste fenômeno, resolvemos a estrutura cristalográfica da ScTrxR2 a 1,9 Å de resolução por meio de substituição molecular utilizando as coordenadas de ScTrxR1 (PDB Id = 3ITJ) como modelo (Oliveira et al., 2010). A ScTrxR2 é uma proteína de dois domínios (domínio de ligação do NADPH e domínio de ligação do FAD). As tiorredoxinas redutases de baixo peso molecular podem adotar duas conformações: flavina oxidada (FO) e flavina reduzida (FR), estando esta última envolvida na interação física com as tiorredoxinas. Aestrutura cristalográfica da ScTrxR2 obtida por nós está na conformação FO. Posteriormente, modelamos a conformação FR (Flavina reduzida) da ScTrxR2, a partir da estrutura do cristal na conformação FO, e utilizando a estrutura cristalográfica da tiorredoxina redutase de E. coli complexada com a tiorredoxina (PDB 1F6M). Pela análises dessas estruturas, levantamos hipóteses de que alguns resíduos de aminoácidos podem estar envolvidos nas interações espécie-específicas entre tiorredoxina redutase e tiorredoxina. Com isso, geramos mutantes sítio dirigidos das Trx de levedura e da ScTrxR2 e através de ensaios enzimáticos e bioquímicos com estas proteínas mutantes estamos testando as hipóteses levantadas sobre possíveis amino ácidos envolvidos em interações entre tiorredoxina e tiorredoxina redutase
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 14.09.2012
  • Acesso online ao documento

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    Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
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    IB12000029017D-1520
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    • ABNT

      NAKAMATSU, Eduardo Hiroshi; SOARES NETTO, Luis Eduardo; SOUZA, Gisele Monteiro de. Caracterização funcional e estrutural do sistema Tiorredoxina mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae. 2012.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012013-155201/ >.
    • APA

      Nakamatsu, E. H., Soares Netto, L. E., & Souza, G. M. de. (2012). Caracterização funcional e estrutural do sistema Tiorredoxina mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012013-155201/
    • NLM

      Nakamatsu EH, Soares Netto LE, Souza GM de. Caracterização funcional e estrutural do sistema Tiorredoxina mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012013-155201/
    • Vancouver

      Nakamatsu EH, Soares Netto LE, Souza GM de. Caracterização funcional e estrutural do sistema Tiorredoxina mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18012013-155201/