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Clonagem, expressão, purificação e caracterização das proteínas do capsídio viral do papilomavírus humano (HPV) (2012)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: CHAVES, ÁGTHA DE ALENCAR MUNIZ - IQ
  • USP Schools: IQ
  • Sigla do Departamento: QBQ
  • Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; PROTEÍNAS; PAPILLOMAVIRUS; MICROBIOLOGIA MÉDICA; NEOPLASIAS; ANTÍGENOS (DESENVOLVIMENTO)
  • Language: Português
  • Abstract: O Câncer Cervical é um importante problema de saúde pública, causando aproximadamente 270 milhões de mortes anuais. Atualmente, esse câncer é o segundo mais comum em mulheres no mundo, com os maiores índices de incidência ocorrendo nos países em desenvolvimento. O Câncer cervical tem como agente etiológico o Papilomavírus Humano (HPV). O vírus possui DNA circular duplo com genes que codificam oito proteínas, E1, E2, E4, E5, E6, E7 (não estruturais), e L1 e L2 (estruturais) que formam o capsídio viral. A proteína L1 quando produzida em sistema heterólgo de expressão tem a capacidade de auto-arranjo em partículas semelhantes ao vírus chamadas de VLPs ("Vírus like Particles"), que são a base das vacinas profiláticas disponíveis, ´GardasiPOT.l®´ e ´CervarixPOT.®´. Neste trabalho, foram produzidas VLPs da proteína L1 do HPV-16 na levedura metilotrófica Pichia pastoris utilizando dois tipos de vetores de expressão para leveduras, um epissomal e outro integrativo, para os trabalhos de purificação. Inicialmente as amostras obtidas ao final da purificação apresentaram degradação e agregação da proteína L1, além de contaminantes. O protocolo de purificação foi modificado e as amostras obtidas no final do processo de purificação não apresentaram degradação e nem agregação da proteína L1, embora ainda tenha sido detectada a presença de contaminantes e, portanto, as amostras obtidas estavam semi-purificadas. Uma segunda abordagem para o desenvolvimento de uma vacina alternativa foi realizada, naqual foram produzidos candidatos vacinais baseados na proteína L2 do Papilomavírus Humano (L2 do HPV-16, L2 do HPV-18 e L2 Multimérica), e também foram expressas proteínas fusionadas ao domínio ZZ de Staphylococcus aureus, utilizado neste caso como adjuvante. Em geral as proteínas de fusão, ainda que apresentando a fusão em sua forma funcional, geraram uma fraca indução de anticorpos IgG e de anticorpos neutralizantes. Pode-se observar uma produção de anticorpos neutralizantes contra pseudovírus homólogos e heterólogos que dependeu da combinação com os adjuvantes utilizados. Numa tentativa de maximizar a eficiência imunológica dos antígenos utilizados, um novo ensaio de imunização foi realizado com uma formulação conjunta contendo três proteínas (L2 do HPV-16, L2 do HPV-18 e L2 Multimérica), sendo também avaliadas as propriedades de três adjuvantes. A combinação da formulação vacinal com os adjuvantes gerou altos níveis de anticorpos L2-específicos, destacando-se as formulações com o hidróxido de alumínio/MPLA e com a vacina celular Pertussis low. Com a utilização desses adjuvantes, os níveis de anticorpos permaneceram elevados a longo termo. Pode-se observar a imunogenicidade de cada um dos antígenos dependeu de sua formulação com os adjuvantes testados
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 17.12.2012
  • Acesso online ao documento

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    • ABNT

      CHAVES, Ágtha de Alencar Muniz; HO, Paulo Lee. Clonagem, expressão, purificação e caracterização das proteínas do capsídio viral do papilomavírus humano (HPV). 2012.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042013-150230/ >.
    • APA

      Chaves, Á. de A. M., & Ho, P. L. (2012). Clonagem, expressão, purificação e caracterização das proteínas do capsídio viral do papilomavírus humano (HPV). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042013-150230/
    • NLM

      Chaves Á de AM, Ho PL. Clonagem, expressão, purificação e caracterização das proteínas do capsídio viral do papilomavírus humano (HPV) [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042013-150230/
    • Vancouver

      Chaves Á de AM, Ho PL. Clonagem, expressão, purificação e caracterização das proteínas do capsídio viral do papilomavírus humano (HPV) [Internet]. 2012 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042013-150230/

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