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Estudo estrutural das enzimas Topoisomerase II Mitocondrial e Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi (2014)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: RODRIGUES, NATHALIA DE CAMPOS - IFSC
  • USP Schools: IFSC
  • Subjects: TRYPANOSOMA CRUZI; CRISTALOGRAFIA; PROTEÍNAS
  • Keywords: Cristalografia de proteínas; Protein crystallography; Topoisomerase
  • Language: Português
  • Abstract: Doenças tropicais negligenciadas compartilham características que permitem que elas persistam nas condições de pobreza, onde se aglomeram e se sobrepõe frequentemente. Mais de um bilhão de pessoas sofrem de uma ou mais doenças tropicais negligenciadas. Entre estas está a doença de Chagas, resultante da infecção pelo protozoário parasito hemoflagelado Trypanosoma cruzi, tendo insetos triatomíneos como vetores. Topoisomerases são enzimas envolvidas na regulação do superespiralamento do DNA resolvendo problemas topológicos associados com replicação, transcrição, recombinação e reparo. As topoisomerases do tipo II são essenciais para tripanossomatídeos por atuarem na replicação e organização do DNA contido em uma região especializada da mitocôndria denominada cinetoplasto. O estudo da Topoisomerase II Mitocondrial (TcTopoIImit) foi realizado através de análises sequenciais e estruturais de outras topoisomerases para a determinação de construções para a clonagem. As construções para o domínio N-terminal foram clonadas no vetor pTZ57R/T e subclonadas em vetores do sistema pET para expressão proteica em E. coli. Experimentos de expressão foram realizados em diferentes cepas, vetores, soluções tampão e outros parâmetros variáveis visando a obtenção dos produtos recombinantes na forma solúvel, porém, tais resultados não foram obtidos. A flavoproteína Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi (TcOYE) é uma oxidoredutase que usa NAD(P)H como cofator. Esta enzima é clinicamente relevantedevido ao seu papel no mecanismo de ação de alguns agentes tripanocidas, utilizados no tratamento da doença de Chagas, por produzirem espécies reativas de oxigênio. Neste trabalho, a enzima recombinante TcOYE foi produzida, purificada, cristalizada pelo método de difusão de vapor e sua estrutura cristalográfica, resolvida por substituição molecular e refinada. A TcOYE foi cristalizada nas formas cristalinas P212121 e P21 e os dados de difração foram coletados para o máximo de resolução de 1,27 e 2,00 'ANGSTRON' respectivamente. As coordenadas atômicas e fatores de estrutura das estruturas da TcOYE nas formas cristalinas P212121 e P21 foram depositados no Banco de Dados de Proteínas com os códigos de acesso 4E2B e 4E2D, respectivamente. A TcOYE apresenta um enovelamento canônico em um barril ('alpha'/'beta')8 com o grupo prostético localizado na cavidade maior do sítio ativo. Após a obtenção dos modelos cristalográficos análises sequenciais e estruturais foram realizadas para a TcOYE e outras OYEs. A região 141-156 do subdomínio capping em TcOYE, assim como em outras OYEs, é intrinsecamente desestruturada exibindo altos valores de fatores B. A região mais divergente entre as OYEs é o loop estendido (289-297), que pode variar em comprimento e composição mudando o volume e a acessibilidade ao sítio ativo
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 17.01.2014
  • Acesso online ao documento

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    IFSC82002316Te2316
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    • ABNT

      RODRIGUES, Nathalia de Campos; OLIVA, Glaucius. Estudo estrutural das enzimas Topoisomerase II Mitocondrial e Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi. 2014.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2014. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24032014-151614/ >.
    • APA

      Rodrigues, N. de C., & Oliva, G. (2014). Estudo estrutural das enzimas Topoisomerase II Mitocondrial e Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi. Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24032014-151614/
    • NLM

      Rodrigues N de C, Oliva G. Estudo estrutural das enzimas Topoisomerase II Mitocondrial e Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24032014-151614/
    • Vancouver

      Rodrigues N de C, Oliva G. Estudo estrutural das enzimas Topoisomerase II Mitocondrial e Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24032014-151614/