Caracterização do padrão de expressão de BhC4-1-lacZ em linhagens de Drosophila melanogaster transformadas com diferentes versões do ativador de glandula anelar do gene BhC4-1 (2013)
- Authors:
- Autor USP: CHIERICI, IVANA MARIA FURTADO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: GLÂNDULAS ENDÓCRINAS; REGULAÇÃO GÊNICA; DROSOPHILA
- Language: Português
- Abstract: Nosso laboratório dedica-se à investigação de mecanismos reguladores de expressão gênica em eucariotos superiores. Como modelo de estudo, utilizamos o gene de pufe de DNA BhC4-1, de Bradysia hygida, expresso e amplificado na glândula salivar no final do quarto estádio larval, em resposta ao aumento dos nivele de ecdisona que promovem a metamorfose. Mais recentemente, demonstramos que o gene BhC4-1 é também amplificado e expresso de modo regulado no desenvolvimento em outro órgão larval, a glândula protorácica. A caracterização molecular de BhC4-1 foi estendida por ensaios funcionais e os dados obtidas revelaram conservação dos mecanismos reguladores da expressão do gene BhC4-1 em D. melanogaster. A caracterização funcional da região promotora de BhC4-1 identificou elementos cisreguladores que regulam a expressão do gene na glândula salivar e na glândula anelar. O fragmento de 67 pb (-253/-187) foi caracterizado funcionalmente como um enhancer de glândula anelar e promove a expressão de BhC4-1 neste tecido a partir do final do desenvolvimento embrionário. Para ampliar a caracterização deste enhancer (-253/-187), foram geradas no laboratório séries de linhagens transformadas com um conjunto de cinco construções (MUT1 a MUT 5) que constituem versões mutadas do mesmo. O presente trabalho teve dois objetivos principais: a) caracterizar o padrão de transcrição do RNAm BhC4-1-lacZ nas linhagens das séries (-253/+40) e (-253/-187) e b) caracterizar o padrão de expressão de BhC4-1-lacZ ao longo do desenvolvimento em linhagens das séries MUT. Nas linhagens das séries (-253/-187) e (-253/+40), a expressão da proteína repórter e inicialmente detectada na glândula anelar no final da embriogênese e continua a ser detectada neste tecido durante os três estádios larvais e durante o estágio de prépupa. Os resultados de experimentas de hibridação in situ mostraram expressão doRNAm BhC4-1-lacZ na glândula anelar a partir do estágio 13 do desenvolvimento embrionário nas linhagens das séries (-253/187) e (-253/+40). Além disso, foi detectada expressão do RNAm BhC4-1-lacZ na glândula anelar de larvas e prépupas das linhagens das séries (-253/-187) e (253/+40). No conjunto, os resultados obtidas revelaram que em embriões, larvas de terceiro estádio e prépupas a expressão da proteína repórter acompanha a expressão do RNAm BhC4-1-lacZ nas linhagens das séries (-253/-187) e (-253/+40). A análise do padrão de expressão da proteína repórter, nas linhagens da série MUT, revelou que as mutações ingeridas nas construções MUT1 e MUT2 não alteram o padrão de expressão promovido pelo enhancer de glândula anelar. Situação distinta é verificada no caso das mutações ingeridas nas construções MUT3, MUT4 e MUT5 que promoveram alterações importantes na atividade do enhancer, indicando que as regiões mutadas nestas construções contêm sitias de ligação de fatores de transcrição essenciais para a expressão de BhC4-1 na glândula anelar. As linhagens da série MUT foram também analisadas quanto ao padrão de expressão do RNAm BhC4-1-lacZ no final do desenvolvimento embrionário. Os resultados obtidas revelaram que nas linhagens da série MUT a expressão da proteína repórter acompanha a expressão do RNAm BhC4-1-lacZ na glândula anelar, no final do desenvolvimento embrionário. No conjunto, os dados obtidas contribuem para estender a caracterização molecular e funcional do enhancer de glândula anelar do gene BhC4-1
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 20.08.2013
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ABNT
FURTADO, Ivana Maria de Araújo. Caracterização do padrão de expressão de BhC4-1-lacZ em linhagens de Drosophila melanogaster transformadas com diferentes versões do ativador de glandula anelar do gene BhC4-1. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 27 abr. 2024. -
APA
Furtado, I. M. de A. (2013). Caracterização do padrão de expressão de BhC4-1-lacZ em linhagens de Drosophila melanogaster transformadas com diferentes versões do ativador de glandula anelar do gene BhC4-1 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Furtado IM de A. Caracterização do padrão de expressão de BhC4-1-lacZ em linhagens de Drosophila melanogaster transformadas com diferentes versões do ativador de glandula anelar do gene BhC4-1. 2013 ;[citado 2024 abr. 27 ] -
Vancouver
Furtado IM de A. Caracterização do padrão de expressão de BhC4-1-lacZ em linhagens de Drosophila melanogaster transformadas com diferentes versões do ativador de glandula anelar do gene BhC4-1. 2013 ;[citado 2024 abr. 27 ]
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