Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer (2014)
- Authors:
- Autor USP: MIRANDA, BEATRIZ NOGUEIRA MESSIAS DE - IQSC
- Unidade: IQSC
- Subjects: RECEPTORES; BIOMARCADORES; ESCHERICHIA COLI; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: Nos últimos anos a incidência do câncer tem crescido significativamente mundialmente, porém, as técnicas atualmente empregadas para a detecção da doença não são individualmente conclusivas, além de serem extremamente invasivas e não permitirem seu diagnóstico precoce, o que justifica o desenvolvimento de novas tecnologias alternativas para a detecção do câncer. Células cancerígenas possuem receptores específicos de alta afinidade com folato e por serem altamente replicativas, são extremamente dependentes do suprimento de folato reduzido. Os alfa-receptores de folato (FRα) são proteínas com propriedades bioquímicas específicas as quais podem ser exploradas pela estratégia de marcação para detecção e tratamento do câncer (biomarcadores). Com raras exceções, são induzidos seletivamente em tecidos cancerígenos e raramente expressos em células normais, mostrando-se, assim, altamente seletivos e específicos. Sendo assim, neste projeto objetivou-se a expressão e a purificação dos FRα, além da sua imobilização em microssistema para estudos subsequentes em biossensores. Foram promovidos testes de expressão da proteína heteróloga (rFR) em E. coli em diferentes linhagens, temperaturas e tempos de indução da expressão sendo observada a expressão da proteína recombinante de forma insolúvel. Paralelamente foram promovidos testes de expressão da proteína rFR em P. pastoris, os quais não se mostraram eficientes, uma vez que não foi possível a detecção da proteína em estudoComo alternativa, uma nova construção, em fusão com a proteína Trigger factor (TF) de E. coli, uma chaperona molecular de alta solubilidade, foi testada. Através de análises por SDS-PAGE, Western Blot, OFFGEL e espectrometria de massas, foi possível comprovar a produção da proteína recombinante TFFR. Ainda, a proteína foi imobilizada em lipossomos, o que proporcionou o desenvolvimento de um padrão analítico que poderá ser utilizado em estudos subsequentes com biossensores de FRα. Este estudo será útil para o desenvolvimento de drogas visando a inativação desta proteína, como os anti-folatos, que são hoje os agentes anti-neoplásicos mais investigados, e possibilitará a caracterização bioanalítica da proteína FRα recombinante (rFRα) bem como o desenvolvimento de novos biossensores
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2014
- Data da defesa: 22.08.2014
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ABNT
MIRANDA, Beatriz Nogueira Messias de. Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2014. . Acesso em: 14 maio 2024. -
APA
Miranda, B. N. M. de. (2014). Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. -
NLM
Miranda BNM de. Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. 2014 ;[citado 2024 maio 14 ] -
Vancouver
Miranda BNM de. Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. 2014 ;[citado 2024 maio 14 ]
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