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Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer (2014)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: MIRANDA, BEATRIZ NOGUEIRA MESSIAS DE - IQSC
  • USP Schools: IQSC
  • Subjects: RECEPTORES; BIOMARCADORES; ESCHERICHIA COLI; BIOQUÍMICA
  • Language: Português
  • Abstract: Nos últimos anos a incidência do câncer tem crescido significativamente mundialmente, porém, as técnicas atualmente empregadas para a detecção da doença não são individualmente conclusivas, além de serem extremamente invasivas e não permitirem seu diagnóstico precoce, o que justifica o desenvolvimento de novas tecnologias alternativas para a detecção do câncer. Células cancerígenas possuem receptores específicos de alta afinidade com folato e por serem altamente replicativas, são extremamente dependentes do suprimento de folato reduzido. Os alfa-receptores de folato (FRα) são proteínas com propriedades bioquímicas específicas as quais podem ser exploradas pela estratégia de marcação para detecção e tratamento do câncer (biomarcadores). Com raras exceções, são induzidos seletivamente em tecidos cancerígenos e raramente expressos em células normais, mostrando-se, assim, altamente seletivos e específicos. Sendo assim, neste projeto objetivou-se a expressão e a purificação dos FRα, além da sua imobilização em microssistema para estudos subsequentes em biossensores. Foram promovidos testes de expressão da proteína heteróloga (rFR) em E. coli em diferentes linhagens, temperaturas e tempos de indução da expressão sendo observada a expressão da proteína recombinante de forma insolúvel. Paralelamente foram promovidos testes de expressão da proteína rFR em P. pastoris, os quais não se mostraram eficientes, uma vez que não foi possível a detecção da proteína em estudoComo alternativa, uma nova construção, em fusão com a proteína Trigger factor (TF) de E. coli, uma chaperona molecular de alta solubilidade, foi testada. Através de análises por SDS-PAGE, Western Blot, OFFGEL e espectrometria de massas, foi possível comprovar a produção da proteína recombinante TFFR. Ainda, a proteína foi imobilizada em lipossomos, o que proporcionou o desenvolvimento de um padrão analítico que poderá ser utilizado em estudos subsequentes com biossensores de FRα. Este estudo será útil para o desenvolvimento de drogas visando a inativação desta proteína, como os anti-folatos, que são hoje os agentes anti-neoplásicos mais investigados, e possibilitará a caracterização bioanalítica da proteína FRα recombinante (rFRα) bem como o desenvolvimento de novos biossensores
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 22.08.2014

  • Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    IQSC30800039550T2721R
    How to cite
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    • ABNT

      MIRANDA, Beatriz Nogueira Messias de; CARRILHO, Emanuel. Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. 2014.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2014.
    • APA

      Miranda, B. N. M. de, & Carrilho, E. (2014). Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. Universidade de São Paulo, São Carlos.
    • NLM

      Miranda BNM de, Carrilho E. Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. 2014 ;
    • Vancouver

      Miranda BNM de, Carrilho E. Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer. 2014 ;