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Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2 (2014)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: ZAPATA, LARA MARTINELLI - FMRP
  • USP Schools: FMRP
  • Subjects: CÉLULAS-TRONCO; DIFERENCIAÇÃO CELULAR; IMUNOLOGIA CELULAR
  • Language: Português
  • Abstract: Estudos anteriores em nosso laboratório mostraram que células-tronco hematopoéticas primitivas de cordão umbilical (CTH) expressam altos níveis de fatores de transcrição (FTs) relacionados à hematopoese primitiva e auto-renovação. Foram identificados componentes chaves da via não-canônica de NF-kB (incluindo as subunidades RELB and NF-kB2), sugerindo que essa via seria responsável por algumas das características intrínsecas primitivas dessas células. Enquanto que o papel da via não-canônica de NF-kB em CTH na auto-renovação foi posteriormente confirmada por outros, seu papel em células-tronco embrionárias (CTEs) ainda permanece desconhecido. CTEs possuem o potencial de auto-renovação, além da habilidade de originar células dos três folhetos embrionários, conferindo-lhes um grande potencial terapêutico. Com isso em mente, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o papel da via NF-kB na pluripotência e diferenciação em células pluripotentes. Nós avaliamos a modulação transcricional dos componentes centrais envolvidos em ambas as vias de NF-kB: a clássica ou canónica (mediada pelos componentes RELA e NF-kB1 e a não-canônica ou constitutiva (mediada por RELB e NF-kB2). Para isso, nós utilizamos a linhagem pluripotente de carcinoma embrionário NTera-2. 1 x‘10 POT.6’ células por poço foram semeadas em placas de 6 poços e cultivadas em DMEM suplementado com 10% SFB. Após 24 horas, as células foram tratadas com ácido retinóico (atRA; 10 µM), indutor de diferenciação, por 2, 4 e 8 dias. Células NTera-2 sob as mesmas condições de cultivo, porém sem atRA, foram usadas como controle. O experimento foi realizado em triplicaras. Seguidas a extração de RNA (método Trizol) e a transcrição reversa, os transcritos foram analisados por PCR em tempo real. As analyses estatísticas foram realizadas usando o teste ANOVA seguido de Tukey pelo software GraphPad Prism 5(as diferenças foram consideradas significativas quando p<0.05). Sob diferenciação, a expressão de RELA e NF-kB1 foi induzida (quando comparada aos respectivos controles), atingindo a significância estatística no 8º dia após o tratamento com atRA. Ao contrário, os níveis dos transcritos RELB e NF-kB2 foram reduzidos, atingindo a significância estatística já no 4º dia. Os genes LIF e LIN-28 apresentaram um padrão de expressão similar ao de RELB e NF-kB2, em contrapartida, a expressão de STAT 3A e STAT 3B foi praticamente constante, não havendo variação significativa entre os níveis de expressão no grupo controle e tratado, com excessão do 4° dia de tratamento. As tendências contrárias observadas para os FTs chaves das vias canónica e não-canônica de NF-kB durante a diferenciação da linhagem Ntera-2 sugerem seu envolvimento em dois processos distintos: a via canónica regulando a diferenciação e a não-canônica atuando na manutenção da pluripotência
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 12.06.2014

  • Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FMRP11200066399Zapata, Lara Martinelli
    How to cite
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    • ABNT

      ZAPATA, Lara Martinelli; PANEPUCCI, Rodrigo Alexandre. Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. 2014.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014.
    • APA

      Zapata, L. M., & Panepucci, R. A. (2014). Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Zapata LM, Panepucci RA. Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. 2014 ;
    • Vancouver

      Zapata LM, Panepucci RA. Estudo da via NF-kB na diferenciação de células pluripotentes NTera-2. 2014 ;

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