Regulação da via GSK-3β/β- Catenina no músculo esquelético de ratos suplementados com leucina e submetidos à atrofia (2014)
- Authors:
- Autor USP: MORISCOT, ANSELMO SIGARI - ICB
- Unidade: ICB
- Subjects: ANATOMIA; MÚSCULO ESQUELÉTICO; ATROFIA MUSCULAR; EXPRESSÃO GÊNICA; RATOS WISTAR
- Language: Português
- Abstract: Introdução: Recentemente foi descrito o envolvimento de GSK3-beta sobre a expressão gênica de componentes da via ubiquitina-proteassoma. Em estudo de nosso laboratório demonstramos que leucina foi capaz de atenuar fortemente a expressão gênica de E3 ligases e a perda de massa muscular. Apesar do conhecido efeito antiatrofico de leucina, ainda não está claro como este aminoácido exerce essa função. GSK3-beta surge como um possível alvo, pois esta proteína é essencial para a expressão gênica de Atrogin-1 e MuRF1, além de possuir importante papel de integração metabólica. Objetivos: Analisar o comportamento (níveis totais de expressão e ativação) da via GSK3beta/beta-Catenina em resposta à suplementação de leucina durante a atrofia muscular esquelética. Metodos: Ratos Wistar (~4 meses e 250g) divididos em 4 grupos de 4 animais cada, designados como, Controle, Imobilizados, tratados apenas com leucina e imobilizados tratados com leucina, submetidos a diferentes períodos de tratamento: 1 e 3 dias, os animais suplementados receberam cerca de 2,7mg/kg corporal diariamente. Decorrido o período de tratamento os animais foram sacrificados e tiveram os músculos sóleos extraídos, aliquotados e armazenados a -80°C para análise. Partes do tecido foram submetidas à extração de proteína total corridas em gel e transferidas para membranas de nitrocelulose, logo depois incubada com solução de anticorpo para GSK3-beta e GSK3-beta phospho, em seguida incubado com solução com anticorpos secundários. A revelação das bandas foi realizada através de reação enzimática com NBT/BCIP. Secções transversais seriadas dos músculos sóleos foram submetidas à analise da localização celular utilizando anticorpos primários para beta-Catenina e posteriormente incubadas com anticorpos secundários conjugados com fluoróforos. As imagens foram obtidas em microscópio de fluorescênciaResultados: Através da técnica de Western Blot, notamos que a expressão proteica de GSK3- beta Phospho (Ser 9) sofre uma redução após 1 dia de imobilização (redução de ~80% vs. Controle, p<0.05), entretanto, esta redução é revertida após suplementação com o aminoácido leucina (95% vs. Controle). Os imunoblots realizados após 3 dias de imobilização não apresentaram qualquer diferença, evidenciando um efeito cíclico da imobilização sobre GSK-3beta. Utilizando a técnica de imunofluorescência, realizamos a contagem de núcleos positivos para beta-Catenina. Notamos que durante a imobilização (44,11%) ou imobilização e suplementação com Leucina (52,95%) por 1 dia não houve diferença significativa entre os grupos (vs. Controle 45,25%). Esta contagem também foi realizada após 3 dias, no entanto não notamos qualquer diferença significativa neste período. Conclusão: Estes resultados parciais demonstram que a suplementação de leucina possui efeito protetor sobre a perda de massa muscular e aumentou os níveis de GSK3-beta fosforilado, sem mudanças significativas na localização de beta-Catenina. Estes resultados sugerem, até o momento, que a inibição de GSK3-beta possui papel crucial no efeito inibidor de leucina sobre o processo atrófico
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- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental (FeSBE)
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ABNT
BENTO, M. R. et al. Regulação da via GSK-3β/β- Catenina no músculo esquelético de ratos suplementados com leucina e submetidos à atrofia. 2014, Anais.. Caxambu: FeSBE, 2014. . Acesso em: 11 maio 2024. -
APA
Bento, M. R., Baptista, I. L., Silva, W. J., & Moriscot, A. S. (2014). Regulação da via GSK-3β/β- Catenina no músculo esquelético de ratos suplementados com leucina e submetidos à atrofia. In Resumos. Caxambu: FeSBE. -
NLM
Bento MR, Baptista IL, Silva WJ, Moriscot AS. Regulação da via GSK-3β/β- Catenina no músculo esquelético de ratos suplementados com leucina e submetidos à atrofia. Resumos. 2014 ;[citado 2024 maio 11 ] -
Vancouver
Bento MR, Baptista IL, Silva WJ, Moriscot AS. Regulação da via GSK-3β/β- Catenina no músculo esquelético de ratos suplementados com leucina e submetidos à atrofia. Resumos. 2014 ;[citado 2024 maio 11 ] - Effect creatine supplementation upon skeletal muscle wasting during immobilazation
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