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Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real (2014)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: ROCHA JÚNIOR, MAURÍCIO CRISTIANO - FCFRP
  • USP Schools: FCFRP
  • Subjects: INFECÇÕES POR HTLV-I; DIAGNÓSTICO; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
  • Keywords: Confirmatório; HTLV1/2; PCR em tempo real; Confirmation; Diagnostic; Real-time PCR
  • Language: Português
  • Abstract: A significativa prevalência da infecção pelo HTLV-1/2 no Brasil tornou compulsória a triagem sorológica em bancos de sangue desde 1993. A realização de um diagnóstico eficaz e seguro desta infecção tem importância no correto aconselhamento dos pacientes, bem como na adoção de medidas preventivas em relação à transmissão do HTLV-1/2. Entretanto, a ineficiência dos testes confirmatórios disponíveis somado ao alto custo, são fatores limitantes para a conclusão segura do status clínico do paciente. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, padronizar e validar uma plataforma molecular (NAT) multiplex utilizando a metodologia de PCR em tempo real para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2. Para tanto, foi padronizada a PCR em tempo real utilizando o sistema de sondas de hidrólise (TaqMan®) e a região gênica viral pol foi utilizada como alvo dessas reações. As reações foram otimizadas e validadas em amostras de DNA de controles positivos e negativos, amostras de DNA obtidas a partir do sangue total de indivíduos infectados pelo HTLV-1/2, candidatos à doação de sangue e de pacientes infectados por outras viroses (HIV, HBV e HCV). Após a padronização, a plataforma molecular foi validada em relação aos seguintes parâmetros: sensibilidade analítica, sensibilidade diagnóstica, especificidade analítica, especificidade diagnóstica, precisão e robustez. O limite de detecção do teste (LoD) foi de 3,85 cópias/reação para HTLV-1 e 10,88 cópias/reação para HTLV-2. Para a especificidade, não foi observada reação cruzada com os vírus HAV, HBV, HCV, HIV-1 e HIV-2 e B19V obtidas a partir de um painel de referência viral e nem com amostras de indivíduos portadores de HIV, HBV ou HCV. A sensibilidade diagnóstica foi de 94,6% para HTLV-1 e 78,6 % para HTLV-2. O coeficiente de variação encontrado no parâmetro precisão foi de até 0,475%. A metodologia desenvolvida é umasimples, de baixo custo, sensível e altamente específica, portanto, adequada para detecção e discriminação da infecção por este retrovírus. A padronização desta plataforma tem um importante impacto no fortalecimento da capacitação tecnológica nacional. Além disso, propõe seu uso no algoritmo diagnóstico, o qual permitirá a conclusão segura do diagnóstico do HTLV-1/2
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 10.10.2014
  • Acesso online ao documento

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    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FCFRP10600016140Rocha Júnior, Mauricio Cristiano
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    • ABNT

      ROCHA JÚNIOR, Maurício Cristiano; HADDAD, Simone Kashima. Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real. 2014.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/ >.
    • APA

      Rocha Júnior, M. C., & Haddad, S. K. (2014). Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/
    • NLM

      Rocha Júnior MC, Haddad SK. Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/
    • Vancouver

      Rocha Júnior MC, Haddad SK. Desenvolvimento de uma Plataforma Molecular para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2 baseado na metodologia da PCR em tempo real [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17042015-143833/

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