Estudo de metabolismo in vitro do triterpeno pentacíclico amirina empregando microssomas hepático de ratos (2013)
- Authors:
- Autor USP: MOREIRA, FERNANDA DE LIMA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: CINÉTICA; ENZIMAS; TERPENOS; PRODUTOS NATURAIS
- Keywords: Cinética enzimática; Cinética não-michaeliana; Comportamento Sigmoidal; Cooperativismo positivo; Kinetic enzymatic; Natural products; Nonmichaelian kinetic; Positive cooperative; Produto Natural; Sigmoidal behavior
- Language: Português
- Abstract: Os isômeros de posição do triterpeno pentacíclico amirina (alfa e beta), estão presentes em várias espécies de plantas, como a Protium spruceanum. Estas moléculas vêm mostrando várias propriedades farmacológicas importantes, como efeitos anti-inflamatórios, efeito gastroprotetor, efeito antipruriginoso, efeito antitumoral, entre outros, sendo, dessa forma, uma candidata a um novo fármaco. No entanto, o comportamento destas substâncias frente as enzimas do citocromo P450 (CYP 450) ainda não foram estudadas. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo realizar um estudo de metabolismo in vitro com esses triterpenos, caracterizar os parâmetros cinéticos enzimáticos assim como possíveis metabólitos que possam surgir empregando microssomas hepático de ratos. Para isto, foi desenvolvido e validado um método bioanalítico para análise desses triterpenos em microssomas de ratos e análise por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM). Como técnica de preparação das amostras foi empregado a extração liquido-liquido utilizando hexano como solvente extrator. A metodologia para quantificação dos triterpenos em microssomas hepático foi validada de acordo com a legislação vigente para análise de fármacos em fluidos biológicos, avaliando os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão, exatidão, estabilidade e recuperação. Todos os parâmetros avaliados corroboraram com as exigências da legislação. Após validação, iniciou-se os estudospara determinação dos parâmetros cinéticos enzimáticos avaliando a variação do tempo de incubação e da concentração de proteínas microssomais no consumo dos subtratos. Utilizando a faixa linear destes experimentos foi determinada a concentração de 0,25 mg mL-1 e o tempo de incubação de 20 min, respeitando as condições de Velocidade Inicial. Em seguida, ao avaliar a variação da concentração do substrato observou-se que a cinética obtida é do tipo sigmoidal. Dessa forma, para os cálculos dos parâmetros cinéticos foi utilizado a equação de Hill, obtendo Vmax = 0,698 ± 0,022 ?mol/mg proteína/min, S50 = 55,1 ± 10,5 ?M e o coeficiente de Hill 2,7 ± 0,17, já os parâmetros da beta amirina foram: Vmax = 0,775 ± 0,034 ?mol/mg proteína/min, S50 = 130,4 ± 42,8 ?M e coeficiente de Hill 2,5 ± 0,21. A partir destes dados obteve-se o clearance intrínseco para a beta e a alfa amirina de 3,05 mL/min/kg e 6,55 mL/min/kg, respectivamente. Apesar das amirinas serem metabolizadas pelas enzimas da CYP 450, nenhum metabólito foi encontrado. Nesse trabalho, foi demostrando pela primeira vez, o comportamento das enzimas das CYP 450 de ratos frente aos produtos naturais alfa e beta amirina, no qual foi verificado um comportamento atípico, que não segue a cinética michaeliana.
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
- Data da defesa: 01.03.2013
-
ABNT
MOREIRA, Fernanda de Lima. Estudo de metabolismo in vitro do triterpeno pentacíclico amirina empregando microssomas hepático de ratos. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-24062013-140924/. Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Moreira, F. de L. (2013). Estudo de metabolismo in vitro do triterpeno pentacíclico amirina empregando microssomas hepático de ratos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-24062013-140924/ -
NLM
Moreira F de L. Estudo de metabolismo in vitro do triterpeno pentacíclico amirina empregando microssomas hepático de ratos [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-24062013-140924/ -
Vancouver
Moreira F de L. Estudo de metabolismo in vitro do triterpeno pentacíclico amirina empregando microssomas hepático de ratos [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-24062013-140924/ - Estudo in vitro do perfil metabólico do agente antitumoral piplartina frente às enzimas do citocromo P450 e predição de parâmetros farmacocinéticos
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