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Avaliação in vitro e in vivo de nanodispersões líquido cristalinas para veiculação de siRNA-TRP-1 para o tratamento tópico do vitiligo (2015)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: TOFANI, LARISSA BUENO - FCFRP
  • USP Schools: FCFRP
  • Sigla do Departamento: 602
  • Subjects: RNA; VITILIGO; GENES; NANOPARTÍCULAS
  • Keywords: Liquid crystalline nanodispersions; Nanodispersões líquido cristalinas; Pele; siRNA; Skin
  • Language: Português
  • Abstract: O RNA de interferência (RNAi) é um processo envolvido com o silenciamento pós-transcricional de genes, sendo elucidado por moléculas de RNAs de dupla fita de 21-25 nucleotídeos, os small interfering RNA (siRNA), que ocorre naturalmente em uma ampla variedade de animais, plantas e microrganismos. Esse processo têm demonstrado potencial utilização para o tratamento de doenças em que se observa a super-expressão de genes, pois apresentam diversas vantagens como possibilidade de se utilizar esse mecanismo regulatório apenas pelo conhecimento da sequência do gene terapêutico, menores efeitos tóxicos e alta especificidade. Contudo, o principal desafio consiste no desenvolvimento de vetores seguros e eficazes que permitem a utilização do siRNA como terapia, visto que permitem a proteção do siRNA contra degradação enzimática, apresentam meia-vida prolongada na corrente sanguínea e propiciam um efetivo escape endossomal. Nesse sentido, nanopartículas de cristais líquidos associados ao polímero catiônico polietilenoimina (PEI) foram avaliadas como potenciais vetores não-virais para o siRNA específico para a proteína-1 relacionada à tirosinase (TRP-1), como alternativa para o tratamento tópico do vitiligo. Para isso, os cristais líquidos contendo o PEI foram complexados ao siRNA e avaliados quanto à estrutura líquido cristalina por microscopia de luz polarizada e por difração de raios-X a baixo ângulo (SAXS), tamanho de partícula/polidispersividade, potencial zeta e eficiência decomplexação. A citotoxicidade dos sistemas foi avaliada em melanócitos melan-A pelo ensaio do MTT e por citometria de fluxo e, a avaliação da transfecção celular foi realizada por microscopia de fluorescência e por citometria de fluxo. Os diferentes sistemas contendo o polímero PEI apresentaram estruturas líquido cristalinas de fase hexagonal e de fase lamelar pela análise por SAXS, no entanto, a análise sob microscopia de luz polarizada, demonstrou estruturas de fase hexagonal, lamelar e isotrópica. A análise do tamanho de partícula mostrou a presença de sistemas nanoestruturados que foram capazes de se complexar ao siRNA na concentração de 10 ?M. Os estudos em cultura de célula demonstraram a maior viabilidade das células melan-A após tratamento com as nanodispersões líquido cristalinas formadas por monoleína (MO), ácido oleico (AO) e PEI, em relação ao polímero catiônico PEI em sua forma livre. Em relação à transfecção celular por microscopia de fluorescência e por citometria de fluxo foi possível observar a elevada eficiência de transfecção das nanodispersões líquido cristalinas formadas pelo sistema MO:AO:PEI. Resultados de inibição da expressão da proteína TRP-1 foram observadas em células melan-A por Western Blotting, após administração das nanodispersões líquido cristalinas associadas ao siRNA-TRP-1 específico. As nanodispersões liquido cristalinas estudas também proporcionaram maior liberação de siRNA na pele em modelo animal. Esses resultados, demonstram apotencial utilização desses sistemas para a terapia anti-sense de doenças cutâneas como o vitiligo, representando assim, uma importante contribuição para a terapia gênica tópica desta doença
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 04.09.2015
  • Acesso online ao documento

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    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FCFRP10600016302Tofani, Larissa Bueno
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    • ABNT

      TOFANI, Larissa Bueno; BENTLEY, Maria Vitoria Lopes Badra. Avaliação in vitro e in vivo de nanodispersões líquido cristalinas para veiculação de siRNA-TRP-1 para o tratamento tópico do vitiligo. 2015.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-05112015-103546/ >.
    • APA

      Tofani, L. B., & Bentley, M. V. L. B. (2015). Avaliação in vitro e in vivo de nanodispersões líquido cristalinas para veiculação de siRNA-TRP-1 para o tratamento tópico do vitiligo. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-05112015-103546/
    • NLM

      Tofani LB, Bentley MVLB. Avaliação in vitro e in vivo de nanodispersões líquido cristalinas para veiculação de siRNA-TRP-1 para o tratamento tópico do vitiligo [Internet]. 2015 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-05112015-103546/
    • Vancouver

      Tofani LB, Bentley MVLB. Avaliação in vitro e in vivo de nanodispersões líquido cristalinas para veiculação de siRNA-TRP-1 para o tratamento tópico do vitiligo [Internet]. 2015 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-05112015-103546/

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