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Avaliação funcional da arginina N-metiltransferase 6 de Leishmania major (2015)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: LORENZON, LUCAS BIGOLIN - FMRP
  • USP Schools: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: LEISHMANIA; EXPRESSÃO GÊNICA; ARGININA
  • Language: Português
  • Abstract: Por sua importância na saúde mundial, parasitas do gênero Leishmania têm sido amplamente estudados. A regulação da expressão gênica nesses parasitas ocorre principalmente em nível pós-transcricional. Sabe-se que proteínas ligantes de RNA (RBPs) participam em diversas etapas nesse contexto de controle pós-transcricional. Estudos recentes demonstram que Arginina metiltransferases (PRMTs), ao transferirem grupos metil para resíduos de arginina em proteínas diversas desempenham funções importantes, em leveduras e eucariotos superiores, e que boa parte de seus alvos são proteínas ligantes de RNA. Dada a importância das proteínas ligantes de RNA no controle pós-transcricional da expressão gênica, proteínas que as modifiquem e influenciem sua interação com RNA, tornam-se importantes objetos de estudo em Leishmania spp. Neste contexto, nosso objetivo foi desenvolver ferramentas moleculares para estudar uma das Proteína Arginina Metil transferases de Leishmania major, a LmjPRMT6. Produzimos e purificamos LmjPRMT6 recombinante em Escherichia coli, proporcionando condições para realizar ensaios de atividade in vitro, bem como a geração de anticorpos policlonais contra tal proteína. Obtivemos transfectantes de L. major superexpressores de LmjPRMT6, o que nos permitiu avaliar alterações fenotípicas decorrentes de tal aumento na expressão, bem como realizar experimentas de imunoprecipitação, que sugeriram interação de LmjPRMT6 com uma proteína envolvida no controle do balanço oxidativo nestes parasitos, a triparedoxina peroxidase (LmjTryP). Expressamos tal proteína de forma recombinante e geramos anticorpos policlonais contra a mesma, visando entender melhor sua possível interação com LmjPRMT6. Por fim, desenhamos estratégias para gerar transfectantes nocaute para LmjPRMT6. Conseguimos obter transfectantes heterozigotos, deletando uma das cópias de LmjF16.0030 (±) em duas linhagensde L. major, embora não tenhamos obtido sucesso na substituição da segunda cópia. A partir dos resultados obtidos, podemos concluir que (i) as ferramentas moleculares para estudo de LmjPRMT6 foram geradas; (ii) a expressão elevada de LmjPRMT6 alterou a virulência dos parasitas, sugerindo envolvimento desta proteína na infecção; (iii) LmjPRMT6 pode interagir com LmjTryP in vivo e, possivelmente, participar de vias de controle do stress oxidativo; (iv) LmjPRMT6 é potencialmente essencial para os parasitos, como sugere a dificuldade em obter parasitos nocaute para o gene que a codifica, ainda que (v) são necessários experimentos adicionais para a confirmação desta última hipótese, bem como para a avaliação de atividade bioquímica de LmjPRMT6
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 04.09.2015

  • Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FMRP11200067988Lorenzon, Lucas Bigolin
    How to cite
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    • ABNT

      LORENZON, Lucas Bigolin; CRUZ, Ângela Kaysel. Avaliação funcional da arginina N-metiltransferase 6 de Leishmania major. 2015.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015.
    • APA

      Lorenzon, L. B., & Cruz, Â. K. (2015). Avaliação funcional da arginina N-metiltransferase 6 de Leishmania major. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Lorenzon LB, Cruz ÂK. Avaliação funcional da arginina N-metiltransferase 6 de Leishmania major. 2015 ;
    • Vancouver

      Lorenzon LB, Cruz ÂK. Avaliação funcional da arginina N-metiltransferase 6 de Leishmania major. 2015 ;

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