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Desenvolvimento de um teste rápido de aglutinação em látex para o diagnóstico de Escherichia coli enteropatogênica e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga (2014)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: SANTOS, ANNA RAQUEL RIBEIRO DOS - FCF
  • USP Schools: FCF
  • Subjects: TESTES IMUNOLÓGICOS; AGLUTINAÇÃO; ANTICORPOS MONOCLONAIS; DIAGNÓSTICO
  • Language: Português
  • Abstract: Globalmente ocorrem cerca de 800.000 mortes de crianças menores de cinco anos associadas à diarreia, principalmente na África subsaariana, sul da Ásia e América Latina. Dentre os patógenos causadores de diarreia, Escherichia coli diarreiogênica (DEC) é o agente etiológico bacteriano mais comum, incluindo E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli produtora da toxina de Shiga e seu subgrupo enterohemorrágica (STEC/EHEC). Os dados epidemiológicos indicam a importância do diagnóstico precoce e sua realização em locais com pouca infraestrutura. Desta forma o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um teste rápido, sensível e específico para o diagnóstico de EPEC e STEC/EHEC. Primeiramente, foram definidas diferentes condições do cultivo bacteriano: Dulbecco's modified Eagle's (DMEM), DMEM contendo 1% de triptona e DMEM pré-condicionado para o cultivo dos isolados de EPEC/EHEC e avaliação da produção/secreção das proteínas secretadas EspA e EspB, utilizando anticorpos monoclonais (MAb) e policlonais (PAb) anti-EspA ou anti-EspB por ELISA indireto. Para a avaliação da liberação das toxinas de Shiga para o sobrenadante do cultivo bacteriano de STEC/EHEC, foram testados diferentes condições de tratamento, o cultivo bacteriano foi tratado com Triton X-100 e o sedimento foi tratado com tampão de lise B-PER utilizando MAb e PAb anti-Stx1 ou anti-Stx2 por ELISA de captura. Subsequentemente, foi desenvolvido e avaliado o teste de aglutinação em látex para a detecção de EspB em isolados de EPEC/EHEC, e Stx1 e Stx2 em isolados de STEC/EHEC. EspB foi definida como biomarcador, o MAb anti-EspB como ferramenta para o diagnóstico de EPEC/EHEC, e a condição ideal para a produção/secreção de EspB foi o cultivo em DMEM. Para o diagnóstico de STEC/EHEC a condição ideal para liberação das toxinas Stx foi o tratamento do cultivo com Triton X-100. Tanto o ELISA, como a aglutinação em látex apresentaram sensibilidades eespecificidades exigidas para testes diagnósticos de doenças negligenciadas em países em desenvolvimento e os testes de aglutinação em látex para a detecção destes patógenos foram precisos, rápidos e fáceis de executar, sendo portanto promissores para a utilização em laboratórios com mínima infraestrutura
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 09.05.2014
  • Acesso online ao documento

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    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    CQ30100021992-FT 616.0756-9 S237de
    How to cite
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    • ABNT

      SANTOS, Anna Raquel Ribeiro dos; PIAZZA, Roxane Maria Fontes. Desenvolvimento de um teste rápido de aglutinação em látex para o diagnóstico de Escherichia coli enteropatogênica e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga. 2014.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2014. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-04032016-133533/ >.
    • APA

      Santos, A. R. R. dos, & Piazza, R. M. F. (2014). Desenvolvimento de um teste rápido de aglutinação em látex para o diagnóstico de Escherichia coli enteropatogênica e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-04032016-133533/
    • NLM

      Santos ARR dos, Piazza RMF. Desenvolvimento de um teste rápido de aglutinação em látex para o diagnóstico de Escherichia coli enteropatogênica e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-04032016-133533/
    • Vancouver

      Santos ARR dos, Piazza RMF. Desenvolvimento de um teste rápido de aglutinação em látex para o diagnóstico de Escherichia coli enteropatogênica e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga [Internet]. 2014 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-04032016-133533/

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