A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection (2016)
- Authors:
- Cruz, Tais Fukuta - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP)
- Kanashiro, Tatiana M - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP)
- Castro, Alessandra Marnie Martins Gomes de - Universidade de São Paulo (USP)
- Baldin, Cintia Manzatto - Universidade de São Paulo (USP)
- Richtzenhain, Leonardo José
- Araújo Júnior, João Pessoa - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP)
- Autor USP: RICHTZENHAIN, LEONARDO JOSÉ - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- DOI: 10.1590/s0100-736x2016001200005
- Subjects: CIRCOVIRUS; ELISA EM ANIMAL; VIROSES EM ANIMAIS
- Language: Inglês
- Abstract: Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.
- Imprenta:
- Publisher place: Rio de Janeiro
- Date published: 2016
- Source:
- Título do periódico: Pesquisa Veterinária Brasileira
- ISSN: 0100-736X
- Volume/Número/Paginação/Ano: v. 36, n. 12, p. 1171-1177, 2016
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
- URL de acesso aberto
- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc
-
ABNT
CRUZ, Tais Fukuta et al. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 36, n. 12, p. 1171-1177, 2016Tradução . . Disponível em: https://doi.org/10.1590/s0100-736x2016001200005. Acesso em: 25 abr. 2024. -
APA
Cruz, T. F., Kanashiro, T. M., Castro, A. M. M. G. de, Baldin, C. M., Richtzenhain, L. J., & Araújo Júnior, J. P. (2016). A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. Pesquisa Veterinária Brasileira, 36( 12), 1171-1177. doi:10.1590/s0100-736x2016001200005 -
NLM
Cruz TF, Kanashiro TM, Castro AMMG de, Baldin CM, Richtzenhain LJ, Araújo Júnior JP. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection [Internet]. Pesquisa Veterinária Brasileira. 2016 ; 36( 12): 1171-1177.[citado 2024 abr. 25 ] Available from: https://doi.org/10.1590/s0100-736x2016001200005 -
Vancouver
Cruz TF, Kanashiro TM, Castro AMMG de, Baldin CM, Richtzenhain LJ, Araújo Júnior JP. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection [Internet]. Pesquisa Veterinária Brasileira. 2016 ; 36( 12): 1171-1177.[citado 2024 abr. 25 ] Available from: https://doi.org/10.1590/s0100-736x2016001200005 - Titulos de anticorpos fixadores de complemento para o virus da febre aftosa em bubalinos infectados naturalmente
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Informações sobre o DOI: 10.1590/s0100-736x2016001200005 (Fonte: oaDOI API)
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