Estudo de metabolismo in vitro e inibição enzimática do produto natural Licarina A empregando microssomas hepático de humanos (2017)
- Authors:
- Autor USP: FORTES, SIMONE SILVEIRA - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: ENZIMAS; CINÉTICA QUÍMICA
- Keywords: Cinética enzimática; Inibição; Licarina A; Metabolismo in vitro; Microssomas hepáticos de humanos; Enzymatic kinetics; Enzyme inhibition; Human liver microsomes; In vitro metabolism; Licarin A
- Language: Português
- Abstract: Muitos fármacos comercializados tiveram sua origem em produtos naturais e seus derivados. Devido ao grande potencial farmacológico destas novas moléculas pesquisadas, uma etapa importante e inicial no desenvolvimento de um novo fármaco é a avaliação do seu comportamento frente as enzimas do citocromo P450 (CYP 450), incluindo os estudos de interações medicamentosas. Neste contexto, um substrato que merece destaque é a Licarina A (Lic A). Este composto é uma neolignana encontrada em algumas espécies de plantas e vêm demonstrando várias propriedades biológicas promissores, dentre elas destaca-se a atividade anti-leishimania. No entanto, para que esta substancia com comprovada atividade se torne um fármaco é necessário realizar, na fase pré-clínica, estudos sobre seu perfil metabólico frente às enzimas do CYP450 e estudos de interação medicamentosa. Portanto, esta Tese teve como objetivo determinar os parametros enzimáticos utilizando microssomas hepáticos de humanos através do estudo de metabolismo in vitro com esta molécula e realizar estudos de interação medicamentosa através dos estudos de inibição enzimática e pesquisar a isoforma do CYP450 que metaboliza predominantemente este produto natural através do emprego de enzimas recombinantes de humanos. Primeiramente, foi desenvolvido um método analítico para a determinação do produto natural Licarina A em meio microssomal. As análises foram realizadas por cromatografia liquida de alta eficiência empregando a coluna Ascentis C 18 e fase móvel composta por metanol: solução aquosa de ácido fórmico 0,1% (75:25, v/v); a vazão empregada foi de 1,0 mL min'. O método foi validado na faixa de concentração de 0,383 a 76,65 amos L-', com coeficiente de correlação linear de 0,99 e limite de quantificação de 0,383 amor L-'. A precisão e exatidão apresentaram resultados dentro do recomendável pela ANVISA. Após validaçãodo método, estabeleceram-se as condições lineares para a depleçao da Lic A no meio microssomal e posteriormente, a cinética foi determinada em condições de velocidade inicial utilizando para tanto 0,20 mg mL' de concentração de proteínas microssomais e 20 minutos de tempo de incubação. O comportamento observado na cinética enzimática para a depleção da Lic A foi um comportamento atípico, caracterizada pelo modelo cinética de Hill. Os valores de Vmax, Sso e coeficiente de Hill foram, 1,651 μmol mg-' mine, 3,87 μmol mg-' e 2,0 respectivamente. A partir dos parametros cinéticos o valor de clearance intrínseco (Clivei) para a Lic A foi de 0,22 mL min-' mg-'l. Posteriormente, a correlação in vitro in vivo foi realizada e foi observado um clareance hepático (CLhep) de 20 mL min-' kg-' e taxa de extração hepática (E) de 1. As isoformas do CYP450 envolvidas no metabolismo da Lic A foram CYP 1A2 e 2B6. Os estudos de inibição mostraram que a Lic A é um inibidor fraco frente as isoformas do CYP450 estudadas, com valores de ICso maiores do que 80 μmol L-'. Embora já tenha sido estudada diferentes vias metabólicas da licarina A com vários metabólitos identificados, esta foi a primeira vez que foi observado a formação de um metabólito in vitro com o uso de microssomas hepático humano. Com o auxílio da espectrometria de massa foi possível a identificação do metabólito de m/z 343 [M+H]+, possivelmente um composto epoxidado, da licarina A
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2017
- Data da defesa: 08.08.2017
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ABNT
FORTES, Simone Silveira. Estudo de metabolismo in vitro e inibição enzimática do produto natural Licarina A empregando microssomas hepático de humanos. 2017. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18012018-152637/. Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Fortes, S. S. (2017). Estudo de metabolismo in vitro e inibição enzimática do produto natural Licarina A empregando microssomas hepático de humanos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18012018-152637/ -
NLM
Fortes SS. Estudo de metabolismo in vitro e inibição enzimática do produto natural Licarina A empregando microssomas hepático de humanos [Internet]. 2017 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18012018-152637/ -
Vancouver
Fortes SS. Estudo de metabolismo in vitro e inibição enzimática do produto natural Licarina A empregando microssomas hepático de humanos [Internet]. 2017 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-18012018-152637/
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