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Investigação de produtos de reação do oxigênio singlete em proteínas por espectrometria de massas e marcação isotópica (2017)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: MARQUES, EMERSON FINCO - IQ
  • USP Schools: IQ
  • Sigla do Departamento: QFL
  • Subjects: OXIGÊNIO; OXIDAÇÃO; LISOZIMAS; ESPECTROMETRIA DE MASSAS
  • Language: Português
  • Abstract: O oxigênio molecular singlete (‘ANTIPOT.1’O IND.2’) é formado em sistemas biológicos e reage com diferentes biomoléculas. Proteínas representam um dos principais alvos de oxidação, devido as suas altas concentrações em organismos. Em pH fisiológico ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ reage com His, Tyr, Met, Cys e Trp. Neste trabalho investigamos a oxidação causada pelo ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ e a formação de dimerização em uma proteína modelo, a lisozima. A identificação dos principais produtos de oxidação e dimerização foi realizada por sequenciamento de peptídeos através de nano cromatografia acoplada a espectrometria de massas (nLC-MS/MS). A geração de ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ foi realizada por fotossensibilização utilizando luz e rosa bengala como fotossensibilizador, e pela decomposição térmica de endoperóxidos derivado do naftaleno DHP’N ANTIPOT.16’O IND.2’ e DHP’N ANTIPOT.18’O IND.2’, uma fonte limpa de ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ no meio reacional. Os resultados demonstraram que a reação do oxigênio singlete com lisozima acarreta oxidação dos resíduos de Met, His e Trp. A caracterização da estrutura primária por nLC-MS/MS dos aminoácidos confirmou a adição de átomos de oxigênio marcado (‘ANTIPOT.18’O). A lisozima é constituída apenas de um resíduo de histidina (‘His POT.15’) e as oxidações identificadas foram adições de massas de +14 Da (descrita como 2-oxo-histidina), +16 e +32 Da. Os resíduos de metionina (‘Met POT.12’ e ‘Met POT.105’) foram identificados como sulfóxidos (MetSO - adição de massas de +16 Da). Para os resíduos de triptofano foram identificados a formação de quinurenina (adição de massas de +4 Da), +16 e +32 Da. As oxidações levaram a formação de dimerização na proteína caracterizada por eletroforese em gel e nLC-MS/MS. O objetivo principal do trabalho foi analisar a ligação cruzada entre o resresíduo de histidina 2-oxohistidina na lisozima. Entretanto, foram identificadas ligações cruzadas entre 2- oxo-histidina e resíduos de lisina, além de ligações cruzadas com resíduos de triptofano oxidado. Em consequência dos resultados obtidos com a proteína modelo, avaliamos as oxidações e formação de dímeros em proteínas extraídas do cristalino do olho bovino. Diferentes tipos de modificações foram observados, além da formação de dímeros entre resíduos de histidina (2-oxoHis-His) caracterizados por nLC-MS/MS e bioinformática. Os dados obtidos neste trabalho, fornecem evidências da ocorrência simultânea de formação de ligações cruzadas entre diferentes proteicas após exposição a ‘ANTIPOT.1’O IND.2’. O trabalho resultou na identificação e sequenciamento através de nLC-MS/MS de peptídeos oxidados por ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ a partir de uma proteína modelo. Esses resultados reiteram o importante papel do ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ em reações com proteínas além do seu envolvimento no desenvolvimento de condições patológicas. A dimerização formada na ligação cruzada em 2-oxo-His-His representa um possível novo biomarcador para o ‘ANTIPOT.1’O IND.2’ em sistemas biológicos.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 01.12.2017
  • Acesso online ao documento

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    CQ30100026034-QT 574.192 M357i
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    • ABNT

      MARQUES, Emerson Finco; MASCIO, Paolo Di. Investigação de produtos de reação do oxigênio singlete em proteínas por espectrometria de massas e marcação isotópica. 2017.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2017. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-12042018-100759/ >.
    • APA

      Marques, E. F., & Mascio, P. D. (2017). Investigação de produtos de reação do oxigênio singlete em proteínas por espectrometria de massas e marcação isotópica. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-12042018-100759/
    • NLM

      Marques EF, Mascio PD. Investigação de produtos de reação do oxigênio singlete em proteínas por espectrometria de massas e marcação isotópica [Internet]. 2017 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-12042018-100759/
    • Vancouver

      Marques EF, Mascio PD. Investigação de produtos de reação do oxigênio singlete em proteínas por espectrometria de massas e marcação isotópica [Internet]. 2017 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-12042018-100759/