Purificação de fatores de coagulação VIII e VII recombinantes para o tratamento das hemofilias A e B produzidos a partir de células humanas (2018)
- Authors:
- Autor USP: GRANOVSKI, VLADIMIR - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: PROTEÍNAS; COAGULAÇÃO; CROMATOGRAFIA; HEMOFILIA; BIOTECNOLOGIA
- Keywords: Cromatografia de proteínas; Fator recombinante VII; Fator recombinante VIII; Purificação de fatores de coagulação; Coagulation factors purification; Hemophilia; Protein chromatography; Recombinant factor VII
- Language: Português
- Abstract: Neste trabalho foram estudados diversos métodos cromatográficos para a purificação de fatores recombinantes de coagulação VII (FVIIr) e VIII (FVIIIr) derivados de linhagens celulares humanas SK-Hep. O FVIIIr é utilizado para o tratamento da Hemofilia A, enquanto o FVIIr é utilizado para o tratamento da Hemofilia B e também a Hemofilia A. Produzir estes fatores em linhagens celulares humanas faz com os padrões de glicosilação, sulfatação e enovelamento destas proteínas sejam extremamente parecidos com os fatores endógenos produzidos no organismo humano. A purificação do FVIIIr através de técnicas de cromatografia multimodais usando a resina CaptoMMC, afinidade usando a resina FVIIISelect e troca iônica (SP-Sepharose) permitiu obter um produto bastante homogêneo e com perfil de banda (por SDS-PAGE) bem definido que demonstrou a presença esperada das cadeias leve e pesada (o Westen-Blott indicou que os anticorpos comerciais reconheceram a cadeia pesada da molécula estudada). As técnicas permitiram uma alta reprodutibilidade do processo onde sequencias de purificação indicaram o mesmo comportamento de perfis cromatográficos e o processo eliminou 99.5% ± 0,5% de proteínas inespecíficas, recuperando até 64% de FVIIIr. O FVIIr foi purificado com apenas uma única técnica cromatográfica usando a resina FVIISelect que isolou a proteína de interesse eliminando cerca de 99% de impurezas, recuperando praticamente todo o produto. O eluido da cromatografia de afinidade foi dialisado emmembranas de 5 kDa o que resultou no processo de auto ativação da molécula de FVIIr, resultando em um aumento de sinal de até 5x em relação a quantidade inicial. O gel de SDS-PAGE e o Westen-Blott comprovaram o processo de auto-ativação no qual uma migração de banda de 50 kDa para 30kDa foi observada e os anticorpos comerciais contra FVII foram capazes de detecta-la. O método de purificação também foi bastante reproduzível e o perfil de banda muito semelhante se comparado ao produto comercial existente no mercado. Sendo assim, foi possível obter plataformas de purificação para as proteínas FVIIr e FVIIIr
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 23.01.2018
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ABNT
GRANOVSKI, Vladimir. Purificação de fatores de coagulação VIII e VII recombinantes para o tratamento das hemofilias A e B produzidos a partir de células humanas. 2018. Mestrado Profissionalizante – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-26042018-173449/. Acesso em: 03 jun. 2024. -
APA
Granovski, V. (2018). Purificação de fatores de coagulação VIII e VII recombinantes para o tratamento das hemofilias A e B produzidos a partir de células humanas (Mestrado Profissionalizante). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-26042018-173449/ -
NLM
Granovski V. Purificação de fatores de coagulação VIII e VII recombinantes para o tratamento das hemofilias A e B produzidos a partir de células humanas [Internet]. 2018 ;[citado 2024 jun. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-26042018-173449/ -
Vancouver
Granovski V. Purificação de fatores de coagulação VIII e VII recombinantes para o tratamento das hemofilias A e B produzidos a partir de células humanas [Internet]. 2018 ;[citado 2024 jun. 03 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-26042018-173449/
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