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Análise funcional do RNA não-codificador longo Incov1 e seu parceiro de interação tudor-SN, no contexto do desenvolvimento casta-específico do ovário de Apis mellifera (2018)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: TIBERIO, GUSTAVO JACOMINI - FMRP
  • USP Schools: FMRP
  • Subjects: BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR; ABELHAS; DIFERENCIAÇÃO CELULAR; OVÁRIO; EXPRESSÃO GÊNICA
  • Language: Português
  • Abstract: A característica mais notável em insetos eussociais é a presença de castas com divisão do trabalho, constituindo a pedra fundamental da organização altamente social. Em Apis mellifera, operárias e rainhas apresentam diferenças morfológicas e fisiológicas relacionadas às suas funções na colônia, sendo o tamanho do ovário a principal diferença entre essas castas e a base anatômica da divisão de trabalho. Nos estágios larvais iniciais, operárias perdem entre 90 a 99% do número de ovaríolos como consequência da morte celular programada (MCP), evento este prevenido em rainha pelos altos níveis de hormônio juvenil (HJ). Trabalhos anteriores em nosso grupo descreveram um RNA não-codificador longo (lncRNA), definido genomicamente pelo gene Incovl, como potencial candidato a possuir um papel na diferenciação do ovário de operária através do processo de morte celular. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi investigar a função deste lncRNA dentro do contexto de determinação do fenótipo ovariano em larvas de Apis mellifera. Pelos efeitos já conhecidos do HJ na prevenção da MCP nos ovários larvais, decidimos avaliar se altos níveis deste hormônio poderiam regular a expressão de Incovl em ovários de larvas de operária. Assim, tais ovários foram tratados in vitro com metopreno, uma molécula análoga ao HJ. Observamos que a expressão de Incovl apresentou uma queda estatisticamente significante, similarmente a de outros genes candidatos da MCP aqui analisados. Uma vez que trabalhos anteriores têm mostrado que o silenciamento do gene codificador da DNA metiltransferase DNMT3 em larvas operárias resultou no desenvolvimento de ovários com fenótipo similar aos de rainhas, analisamos aqui os efeitos da inibição da metilação do DNA através de tratamento com fármaco RG108 na expressão de Incovl. De acordo com o esperado, observamos uma queda na expressão deste gene quandocomparado ao controle. Um lncRNA pode formar complexo com proteínas determinantes para sua função. Sendo assim, com o intuito de identificar possíveis parceiros funcionais do lncovl, realizamos um ensaio pull-down para identificar proteínas que interagem com lncovl por meio de analise por espectrometria de massas. Entre as proteínas identificadas, um especialmente chamou a nossa atenção, a staphylococcal nuclease domain-containing protein 1 (Tudor-SN), esta já relacionada com o processo de morte celular, especialmente quando clivada pela caspase-3. Experimentos RT-qPCR revelaram que tudor-SN e Incovl possuem expressão similar ao longo das fases larvais, com pico em L5F3 de operária, onde a MCP foi descrita como intensa. Em adição, o knockdown de tudor-SN diminuiu os níveis de Incovl bem como a atividade da caspase-3 (clivada), o que reforça a ideia de ação conjunta destes na determinação fenotípica ovariana de operária, sendo este evento chave para a diferenciação de casta em Apis mellifera
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 19.02.2018

  • How to cite
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    • ABNT

      TIBÉRIO, Gustavo Jacomini; HARTFELDER, Klaus H. Análise funcional do RNA não-codificador longo Incov1 e seu parceiro de interação tudor-SN, no contexto do desenvolvimento casta-específico do ovário de Apis mellifera. 2018.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018.
    • APA

      Tibério, G. J., & Hartfelder, K. H. (2018). Análise funcional do RNA não-codificador longo Incov1 e seu parceiro de interação tudor-SN, no contexto do desenvolvimento casta-específico do ovário de Apis mellifera. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Tibério GJ, Hartfelder KH. Análise funcional do RNA não-codificador longo Incov1 e seu parceiro de interação tudor-SN, no contexto do desenvolvimento casta-específico do ovário de Apis mellifera. 2018 ;
    • Vancouver

      Tibério GJ, Hartfelder KH. Análise funcional do RNA não-codificador longo Incov1 e seu parceiro de interação tudor-SN, no contexto do desenvolvimento casta-específico do ovário de Apis mellifera. 2018 ;