Estudos estruturais e funcionais da proteína repressora PhoU na sinalização de transporte de fostato em Xanthomonas axonopodis pv. citri (2018)
- Authors:
- Autor USP: PENA, PâMELA DE OLIVEIRA - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- Subjects: XANTHOMONAS; FOSFATOS; TRANSPORTE ATRAVÉS DA MEMBRANA; PROTEÍNAS
- Keywords: Xanthomonas citri; Xanthomonas citri; Pho Regulon; Pho Regulon; PhoU; PhoU; Pst System; Sistema de Dois Componentes; Sistema Pst; Two component system
- Language: Português
- Abstract: A habilidade de sensoriar o ambiente extracelular e responder às suas mudanças é inerente para a maioria das bactérias. As concentrações de nutrientes direcionam os processos metabólicos relacionados à sobrevivência e proliferação. O fosfato inorgânico (Pi) é um dos nutrientes cuja regulação, sensoriamento e sinalização são bastante conservados em bactéria. Um dos mecanismos de captação do íon fosfato com alta afinidade é o sistema Pst, um transportador do tipo ABC (ATP-Binding Cassette) , localizado na membrana interna das células. Este transportador, juntamente com as proteínas PhoR/PhoB que formam um sistema de dois componentes (Two-Component Regulatory System) , são capazes de sensoriar e monitorar os níveis deste íon nas células. Ambos os sistemas pertencem ao chamado regulon Pho, conjunto de genes envolvidos no transporte, captação e metabolização do fosfato. Estudos tem mostrado que a interação entre os sistema Pst e o sistema doiscomponentes PhoR/PhoB é mediada pela proteína PhoU, um regulador negativo cujo gene encontra-se no mesmo operon do transportador. Apesar de muito estudados em Escherichia coli , poucas informações existem sobre as características destes sistemas em Xanthomonas citri subsp. citri , bactéria responsável pelo cancro cítrico e de grande importância econômica para o país. Estudos realizados pelo nosso grupo mostraram que X. citri conserva a maioria dos genes descritos como pertencentes ao regulon Pho, incluindo o sistema Pst, as proteínas PhoR/PhoB e PhoU.Este trabalho, portanto, tem como objetivos, a caracterização funcional e estrutural da proteína PhoU de X. citri e a análise da possível interação de PhoU com a proteína PhoR, a histidina quinase do sistema dois componentes. Para tal, as proteínas foram expressas em linhagens de E. coli Tuner e purificadas por cromatografia de afinidade a metal, seguida de exclusão molecular. Visando a caracterização biofísica e estrutural da proteína PhoU, foram realizados ensaios de dicroísmo circular, cristalização, análises de bioinformática e modelagem molecular. Os resultados de bioinformática mostraram que PhoU conserva características estruturais e funcionais quando comparada com ortólogos. Após sua purificação, a proteína foi produzida na sua forma enovelada e mostrou interação com ligantes, conforme descrito na literatura para ortólogos. A expressão da proteína PhoR também foi obtida e ensaios de pull-down foram realizados para a caracterização da interação entre PhoU-PhoR. Adicionalmente, foram realizados estudos de expressão das proteínas em diferentes condições de cultivo, utilizando-se anticorpos policlonais anti-PhoU e anti-PhoR. Os resultados apresentados neste projeto são de grande importância uma vez que se obteve a padronização dos processos de produção de ambas as proteínas e ensaios biofísicos e estruturais para a futura caracterização do complexo, o que será de grande relevância para a compreensão do papel destes sistemas na fisiologia da bactéria
- Imprenta:
- Data da defesa: 31.01.2018
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ABNT
PENA, Pâmela de Oliveira. Estudos estruturais e funcionais da proteína repressora PhoU na sinalização de transporte de fostato em Xanthomonas axonopodis pv. citri. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26032018-150211/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Pena, P. de O. (2018). Estudos estruturais e funcionais da proteína repressora PhoU na sinalização de transporte de fostato em Xanthomonas axonopodis pv. citri (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26032018-150211/ -
NLM
Pena P de O. Estudos estruturais e funcionais da proteína repressora PhoU na sinalização de transporte de fostato em Xanthomonas axonopodis pv. citri [Internet]. 2018 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26032018-150211/ -
Vancouver
Pena P de O. Estudos estruturais e funcionais da proteína repressora PhoU na sinalização de transporte de fostato em Xanthomonas axonopodis pv. citri [Internet]. 2018 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-26032018-150211/
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