Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica (2018)
- Authors:
- Autor USP: BOMFIM, ALINE DE SOUSA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: HEMOFILIA; COAGULAÇÃO; BIOCIÊNCIAS
- Keywords: Atividade coagulante; Variantes de FIX; FIX recombinante humano; Hemofilia B; Clotting activity; Recombinant human FIX; FIX variants; Hemophilia B
- Language: Português
- Abstract: O Fator IX (FIX) da coagulação sanguínea é uma proteína dependente de vitamina K de grande valor farmacêutico no tratamento da hemofilia B, o qual é baseado na administração de FIX derivado de plasma humano ou FIX recombinante. A terapia baseada nestas abordagens apresenta limitações como os altos custos e a baixa disponibilidade para a população de hemofílicos. O FIX é uma proteína complexa com grande variedade de modificações pós-traducionais e, por isso, apresenta baixa atividade específica e produtividade. A produção de um FIX recombinante com aumento na sua atividade coagulante pode contribuir para terapias de reposição e gênica mais eficazes nas quais quantidades menores das moléculas cataliticamente melhoradas serão necessárias para se obter os benefícios terapêuticos do FIX. Essa infusão diminuída poderá reduzir ou eliminar a geração de inibidores de FIX, minimizando os efeitos colaterais e reduzindo os custos do tratamento, sendo um dos desafios atuais no tratamento da hemofilia B. Nesse contexto, a engenharia genética tem se tornado uma ferramenta importante na modificação de proteínas de interesse farmacêutico visando a melhora das suas propriedades bioquímicas e biofísicas. Este trabalho teve como objetivo desenvolver novas variantes de FIX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica. Para isso, fizemos um estudo detalhado da estrutura da proteína FIX e geramos três variantes FIX-YKALW, FIX-ALL e FIX-LLW, utilizando a técnica de mutagênese sítiodirigida. Essas variantes foram expressas em células humanas SK-Hep-1 tratadas com vitamina K e as proteínas foram caracterizadas in vitro e in vivo. A quantidade de FIX total secretada no sobrenadante celular foi similar entre as variantes FIX-YKALW e FIX-LLW (3,2 ?g/mL), enquanto FIX-ALL apresentou a menor expressão (1,8 ?g/mL), quantidades 2-3 vezes menores que de FIX controle (FIX-WT). Entretanto, a atividade biológica das variantes foi, em média, 6,2 vezes maior que FIX-WT, com atividade específica 11 vezes maior para FIX-YKALW e FIX-LLW e 24 vezes maior para FIX-ALL. FIX-YKALW apresentou a melhor geração de trombina in vitro dentre as variantes e destacou-se na avaliação da eficiência hemostática em camundongos hemofílicos B, na qual uma dose 5 vezes menor que a recomendada de FIX foi suficiente para promover uma resposta pró-coagulante. Neste trabalho foram desenvolvidas 3 novas variantes de FIX recombinante humano com maior atividade específica que o fator disponível no Sistema Único de Sáude. O FIX-ALL apresentou-se como a proteína mais potente in vitro descrita até o momento e FIX-YKALW como a mais promissora, dentre as mutantes desenvolvidas, na proteção hemostática in vivo. Estudos complementares são necessários para transpor a barreira da pesquisa para a utilização desses novos fatores de coagulação no tratamento da hemofilia B. Entretanto, esse trabalho apresenta novas proteínas com potencial de serem usadas na combinação com a terapia gênica bem como na terapia de reposição
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 26.04.2018
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ABNT
BOMFIM, Aline de Sousa. Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/. Acesso em: 28 mar. 2024. -
APA
Bomfim, A. de S. (2018). Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/ -
NLM
Bomfim A de S. Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica [Internet]. 2018 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/ -
Vancouver
Bomfim A de S. Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica [Internet]. 2018 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/
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