Antifungal activity of punicalagin isolated from Punica granatum and synergism with nystatin against Candida albicans: cellular metabolism, detection of virulence genes and proteomic analysis (2018)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, RAFAELA ALVES DA - FOB
- Unidade: FOB
- Sigla do Departamento: BAE
- Subjects: ANTIFÚNGICOS; ROMÃ; CANDIDA ALBICANS; METABOLISMO CELULAR; GENES; VIRULÊNCIA; PROTEÔMICA; CANDIDÍASE
- Agências de fomento:
- Language: Inglês
- Abstract: Apesar dos avanços terapêuticos, doenças infecciosas por fungos oportunistas têm aumentado em prevalência e tornaram-se um problema universal de saúde pública. Candida albicans (CA) é um fungo comensal que, sob certas condições ambientais, pode atuar como um patógeno oportunista e colonizar mucosas e tecidos causando infecções locais e sistêmicas. O surgimento de cepas resistentes às drogas convencionalmente utilizadas, assim como aumento de pacientes imunodeprimidos, tem limitado as opções terapêuticas. Portanto o objetivo deste estudo foi avaliar: 1) a atividade antifúngica de Punicalagina (P), com ou sem a associação de Nistatina (N), contra duas cepas de CA. 2) O efeito citotóxico de P e N, assim como suas combinações, em culturas primárias humanas de células epiteliais de palato (CEPH) e de fibroblastos gengivais (FGH). Na primeira etapa, leveduras de CA ATCC 90028 e SC5314 foram expostas a P e N, por 24 horas. As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de P (50 g/mL) e N (3,9 g/mL) foram determinadas pelo método de diluição em caldo. O Ensaio Checkerboard foi realizado para verificar o sinergismo entre as combinações (8: PN, P8 N/4, P/8 N/2, P/8 N, P/4 N/2, P/4 N, P/2 N/4 e P/2 N/2), as quais foram selecionadas a partir de 56 combinações inicialmente testadas. O metabolismo fúngico foi avaliado pelo método do XTT (24h) e a Concentração Mínima Microbicida (CMM) foi realizada através de Unidades formadoras de colônias (UFC/mL, 24h). A avaliação da expressão gênica de fatores de virulência foi amplificada e quantificada por PCR em tempo real (Reação em Cadeia da Polimerase-RT-qPCR, apenas para P/8 N/4 em 24h). A análise proteômica para identificação de proteínas alteradas foi realizada por LC-MS/MS (24h). A MIC e MMC de P foram significativamente reduzidas na presença de N, indicando sinergismo entre ambas.Confirmado o potencial antifúngico, o Ensaio de mecanismo de ação (teste do ergosterol) foi realizado e não foi confirmada a ação de P através da ligação ao ergosterol. A avaliação da expressão gênica demonstrou regulação positiva de alguns genes que pode estar relacionado a um mecanismo de defesa associado ao estress ou a morte celular. A análise proteômica revelou proteínas diferencialmente expressas nos fungos expostos a P/8 N/4 em relação ao controle negativo (sem tratamento), as quais estão relacionadas ao processo de metabolismo energético, resposta ao estress e metabolismo de drogas, dentre outros. Na segunda etapa, CEPH e FGH foram expostas a P e N e suas combinações por 24h para realização dos ensaios de viabilidade por Alamarblue. Combinada à N, a Punicalagina apresentou-se menos citotóxica do que de forma isolada. Com base nesses resultados in vitro, o sinergismo antifúngico produzido entre P e N sugere que a combinação das drogas pode ser uma alternativa terapêutica tópica para ser utilizada nos casos de candidose localizada, como por exemplo, a estomatite protética.
- Imprenta:
- Data da defesa: 21.08.2018
-
ABNT
SILVA, Rafaela Alves da. Antifungal activity of punicalagin isolated from Punica granatum and synergism with nystatin against Candida albicans: cellular metabolism, detection of virulence genes and proteomic analysis. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Bauru, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-24012019-151124/. Acesso em: 07 maio 2024. -
APA
Silva, R. A. da. (2018). Antifungal activity of punicalagin isolated from Punica granatum and synergism with nystatin against Candida albicans: cellular metabolism, detection of virulence genes and proteomic analysis (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Bauru. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-24012019-151124/ -
NLM
Silva RA da. Antifungal activity of punicalagin isolated from Punica granatum and synergism with nystatin against Candida albicans: cellular metabolism, detection of virulence genes and proteomic analysis [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 07 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-24012019-151124/ -
Vancouver
Silva RA da. Antifungal activity of punicalagin isolated from Punica granatum and synergism with nystatin against Candida albicans: cellular metabolism, detection of virulence genes and proteomic analysis [Internet]. 2018 ;[citado 2024 maio 07 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-24012019-151124/ - Fitoterápico Equisetum giganteum e estomatite protética: estudo da ação antimicrobiana, antiaderente e anti-inflamatória contra Candida albicans, e potencial citotóxico sobre células epiteliais do palato humano
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