Tese

Desenvolvimento de biossensor baseado na imobilização orientada de DHODH em superfície de eletrodos modificados (2018)

• Authors:
  • Sawazaki, David Tatsuo Atique
  • Naal, Zeki (Orientador)
• Autor USP: SAWAZAKI, DAVID TATSUO ATIQUE - FFCLRP
• Unidade: FFCLRP
• Sigla do Departamento: 593
• Subjects: MITOCÔNDRIAS; POLÍMEROS (QUÍMICA ORGÂNICA); ELETRODO
• Language: Português
• Abstract: Biossensores eletroquímicos têm sido extensamente utilizados devido a sua capacidade de detecção rápida e sua seletividade, uma vez que a transdução do sinal se dá por uma biomolécula e sua interação frente a um substrato. Destacam-se, entre eles, os biossensores enzimáticos, que por muitas vezes permitem a mediação de uma reação redox e seu monitoramento amperométrico. Dentre as enzimas redox utilizadas em biossensores, a grande família das flavoproteínas deve ser destacada, onde situa-se nossa enzima de interesse neste trabalho, a Diidroorotato Desidrogenase (DHODH). As DHODH encontram-se desde organismos mais simples até os mais complexos, como o homem, e sua função está relacionada com a síntese de novo de nucleotídeos de pirimidina, essenciais para a produção de DNA e RNA. Desta forma, a enzima diidroorotato desidrogenase tem surgido como um alvo interessante para potenciais drogas no tratamento de doenças negligenciadas, como a Doença de Chagas e a Leishmaniose, uma vez que a inibição seletiva desta enzima nos parasitas responsáveis por essas patologias levaria à inibição da proliferação celular e morte. Em humanos, a DHODH está relacionada à cadeia respiratória mitocondrial, sendo que o entendimento dos mecanismos relacionadas a esta enzima é benéfico no tratamento e prevenção de desordens redox na célula. Neste trabalho foi proposto a construção de um biossensor baseado na imobilização da enzima HsDHODH na superfície de eletrodos modificados com N-(3-Pirrol-1-il-propil)-4,4'-bipiridinium (PPB) para mediar a atividade da enzima contra seus substratos e também contra possíveis moléculas inibidoras de sua atividade. O monômero do PPB foi sintetizado, caracterizado e seu monômero eletropolimerizado em superfície de eletrodos de carbono vítreo. O polímero apresentou boa estabilidade frente ao tampão e presença de surfactantes. Damesma forma, a expressão e caracterização da enzima HsDHODH fusionada a MBP (Maltose binding protein) foi realizada. Os resultados de cinética indicam que a presença da MBP altera a constante catalítica (kcat) da enzima, diminuindo em torno de três vezes valor. Os valores de KM para ambos os substratos encontram-se diminuídos em torno de 50%. Ao avaliar a enzima sobre o polimero não foi possível a principio definir um pico específico para a mediação direta da enzima MBP-HsDHODH, sendo que o processo do grupo FMN, se presente, não foi distinguível. Entretanto, os ensaios com o inibidor Brequinar, e os resultados de cronoamperometria parecem apontar que a atividade da enzima possa afetar a corrente relativa à redução da quinona. Mais estudos são necessários para confirmar essa hipótese e entender por qual mecanismo se daria tal efeito. Considerando isso, o desenvolvimento de um biossensor usando enzimas mitocondriais permite explorar o comportamento redox de muitas drogas, podendo prever interações que levarão ao aumento de espécies reativas de oxigênio na célula
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2018
• Data da defesa: 14.09.2018

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How to cite

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• ABNT

  SAWAZAKI, David Tatsuo Atique. Desenvolvimento de biossensor baseado na imobilização orientada de DHODH em superfície de eletrodos modificados. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. . Acesso em: 23 abr. 2024.

• APA

  Sawazaki, D. T. A. (2018). Desenvolvimento de biossensor baseado na imobilização orientada de DHODH em superfície de eletrodos modificados (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Sawazaki DTA. Desenvolvimento de biossensor baseado na imobilização orientada de DHODH em superfície de eletrodos modificados. 2018 ;[citado 2024 abr. 23 ]

• Vancouver

  Sawazaki DTA. Desenvolvimento de biossensor baseado na imobilização orientada de DHODH em superfície de eletrodos modificados. 2018 ;[citado 2024 abr. 23 ]

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