Análise do papel da subunidade c-Rel durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical (2018)
- Authors:
- Autor USP: LEÃO, VITOR - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: GENÉTICA; LINFÓCITOS; CORDÃO UMBILICAL
- Keywords: c-REL; ChIP; Induced regulatory T lymphocyte - iTreg; Linfócito T regulatório induzido - iTreg; Naïve T cells; NF-κB; T Naive
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Os linfócitos T regulatórios (Tregs) desempenham um papel essencial no controle da tolerância periférica, regulando a homeostase do sistema imune, e, por este motivo, são consideradas a população celular - com fenótipo regulatório - mais importante do sistema imune. Sob estímulos específicos, as Tregs podem ser geradas naturalmente no timo (nTregs), ou serem induzidas na periferia (pTreg) a partir de células T naive. É possível gerar Tregs in vitro (iTreg) a partir de células T CD4+ naive isoladas de sangue de cordão umbilical, suplementando a cultura com TGF-β, atRA e IL-2. Haja vista o grande potencial terapêutico das iTregs, a comunidade científica apresenta grande interesse no entendimento dos mecanismos envolvidos em sua geração. Os mais recentes trabalhos indicam um importante papel da via NF- kB na geração destas células, especialmente no que tange o componente c-Rel. Entretanto, na literatura, não existem dados suficientes sobre a avaliação dos genes potencialmente orquestrados por este fator. Permeado por todo este questionamento, o presente trabalho avalia a interação de c-Rel com as regiões promotoras do genoma, em células T naive e nas células iTregs geradas in vitro. Em adição, também avalia o efeito do silenciamento da proteína c-Rel no perfil de geração das iTregs. Para isso, foi utilizada a metodologia de imunoprecipitação de cromatina atrelada à técnica de PCR em tempo real com primers, que cobrem as regiões promotoras de alguns genes com papel importante na biologia de células T naive e de iTreg. Também foi avaliado a eficiência de transfecção de siRNA contra c-Rel e também do siRNA marcado com molécula fluorescente FITC em conjunto com diferentes concentrações e diferentes reagentes de transfecção, utilizando células Jurkat e T naive. Nossos resultados mostraram uma melhor eficiência de transfecção do siRNA FITCconsiderando as células viáveis transfectadas, com os agentes DharmaFECT®1 (22,14%), DharmaFECT®4 (43,14%) e DMRIE-C (27,59%) em células Jurkat e DharmaFECT®1 (16,35%) e DMRIE-C (25,94%) em células T naive, nas maiores concentrações, entretanto não é muito eficiente para a avaliação do silenciamento proteico por qPCR. Além disso demonstramos que em uma pureza média de 80,46% de células Tnaive isoladas obtivemos a geração das iTregs (CD4+CD25+CD127-FOXP3+) com 98,42%, em média, na expressão do marcador FOXP3, e essas células iTregs apresentam maior ligação de c-Rel aos promotores de genes como IL2RA (CD25) (média de 8,26 vezes), CD69 (3,71 vezes), regiões do gene FOXP3 (região promotora (20,15 vezes), região CNS -kbl (16,9 vezes), kb2 (17,2 vezes) e kb3 (23,29 vezes)) e do próprio Rel (8,12 vezes). Estes resultados evidenciam os potenciais mecanismos de regulação exercidos por c-Rel, durante o processo de geração das iTregs
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 04.02.2018
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ABNT
LEÃO, Vitor. Análise do papel da subunidade c-Rel durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-03062019-155201/. Acesso em: 16 abr. 2024. -
APA
Leão, V. (2018). Análise do papel da subunidade c-Rel durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-03062019-155201/ -
NLM
Leão V. Análise do papel da subunidade c-Rel durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical [Internet]. 2018 ;[citado 2024 abr. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-03062019-155201/ -
Vancouver
Leão V. Análise do papel da subunidade c-Rel durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical [Internet]. 2018 ;[citado 2024 abr. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-03062019-155201/ - Avaliação global do papel da subunidade c-REL de NF-kB, na regulação transcricional durante a indução in vitro de células T regulatórias (iTreg), por meio da técnica de imunoprecipitação de cromatina atrelada ao uso de microarrays (ChIP-chip)
- Non-syndromic intellectual disability and its pathways: a long noncoding RNA perspective
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