Obtenção de peptidases heterólogas do fungo filamentoso Rhizomucor miehei a partir de análise do transcriptoma (2021)
- Authors:
- Autor USP: MARTINS, JULIA RASPANTE - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- DOI: 10.11606/D.60.2021.tde-04112021-153810
- Subjects: ENZIMAS; ENZIMAS HIDROLÍTICAS; BIOTECNOLOGIA; FUNGOS; RNA
- Keywords: Enzimas recombinantes; Fungal peptidases; Hidrolases; Hydrolases; Peptidases fúngicas; Recombinant enzymes
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Enzimas são proteínas catalizadoras amplamente utilizadas em diferentes tipos de indústrias, sendo as de origem microbiana as mais comuns. Os microrganismos possuem grande diversidade genética o que os tornam fontes promissoras para pesquisa e identificação de enzimas com o potencial biotecnológico. O fungo termofílico Rhizomucor miehei é conhecido por produzir hidrolases com potencial de aplicação industrial, sobretudo as subclasses lipases e peptidases. A aplicabilidade das novas peptidases é influenciada pela caracterização funcional e por fatores que contribuem e modulam sua estabilidade térmica. Este trabalho apresenta ensaios de atividade enzimática do filtrado de cultura de R. miehei, construção e análise do seu transcriptoma, análises in silico de duas de suas peptidases e expressão das últimas em Pichia pastoris. O cultivo submerso do fungo foi realizado em um meio suplementado com quatro fontes orgânicas complexas (celulose microcristalina, azeite, caseína e farinha de pena) que atuam como indutores da produção de enzimas despolimerizantes. O filtrado de cultura, obtido a partir dos cultivos, foi utilizado para determinação da atividade enzimática de peptidases, lipases, amilases, endoglucanases, xilanases e lacases. A massa micelial, também proveniente dos cultivos, foi destinada à extração de RNA para sequenciamento e construção do transcriptoma. Foi detectado atividade hidrolítica de peptidases, amilases e lipases, com perfis diferentes em relação à suplementação do meio de cultivo, evidenciando o potencial das enzimas secretadas pelo fungo. No sequenciamento, foram obtidas 69080 sequências de transcrição e, dessas sequências, quase 70% tiveram correspondência comproteínas revisadas do UniProtKB. Entre as sequências anotadas, aproximadamente um terço são hidrolases, sendo 404 peptidases diferentes. Foram selecionadas duas sequências do transcriptoma que codificam uma aspártico peptidase e uma carboxipeptidase, com base na anotação funcional, para análise do potencial biotecnológico in silico e expressão heteróloga. A clonagem, expressão heteróloga e purificação da aspártico peptidase mostrou-se factível enquanto para a carboxipeptidase, apesar de ter sido devidamente clonada, não foi possível detectar expressão no meio extracelular
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2021
- Data da defesa: 01.09.2021
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- Este artigo é de acesso aberto
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
MARTINS, Júlia Raspante. Obtenção de peptidases heterólogas do fungo filamentoso Rhizomucor miehei a partir de análise do transcriptoma. 2021. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-04112021-153810/. Acesso em: 20 maio 2024. -
APA
Martins, J. R. (2021). Obtenção de peptidases heterólogas do fungo filamentoso Rhizomucor miehei a partir de análise do transcriptoma (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-04112021-153810/ -
NLM
Martins JR. Obtenção de peptidases heterólogas do fungo filamentoso Rhizomucor miehei a partir de análise do transcriptoma [Internet]. 2021 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-04112021-153810/ -
Vancouver
Martins JR. Obtenção de peptidases heterólogas do fungo filamentoso Rhizomucor miehei a partir de análise do transcriptoma [Internet]. 2021 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-04112021-153810/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.60.2021.tde-04112021-153810 (Fonte: oaDOI API)
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