Expressão, caracterização e avaliação funcional de anticorpos humanos antitetânicos (2021)
- Authors:
- Autor USP: TAKATA, DANIELA YUMI - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- DOI: 10.11606/T.87.2021.tde-28112022-103622
- Subjects: ANTICORPOS MONOCLONAIS; TÉTANO; TOXINAS; NEUTRALIZAÇÃO; LINHAGEM CELULAR; WESTERN BLOTTING
- Keywords: Anticorpos monoclonais humanos; Human monoclonal antibodies; Linhagem celular estável; Neutralização da toxina tetânica; Stable cell lines generation; Tétano; Tetanus; Tetanus toxin; Tetanus toxin neutralization; Toxina tetânica
- Language: Português
- Abstract: Tétano é uma doença neuromuscular causada exclusivamente pela ação da exotoxina produzida pelo Clostridium tetani (C. tetani). Apesar da existência de uma vacina segura e de baixo custo, a incidência e mortalidade do tétano ainda são preocupantes. Por isso, em casos com risco de tétano, a imunização passiva com soro contendo anticorpos antitetânicos equinos (SAT) ou com imunoglobulina humana hiperimune antitetânica (IGHAT) é utilizada. Em busca de terapia baseada na biotecnologia moderna, nosso grupo obteve anteriormente anticorpos monoclonais (mAbs) humanos antitetânicos derivados de linfócitos B isolados por single cell sorting. O objetivo deste trabalho foi ampliar e avaliar o painel de mAbs antitetânicos, visando a proposta de candidatos promissores para um futuro uso na terapia. O painel de mAbs foi testado por ELISA e Western Blot e inibição à ligação da toxina tetânica (TeNT) ao GT1b. Cinco mAbs foram analisados em microarray para identificar seus epítopos, e em ensaio de neutralização da toxina in vivo, individualmente ou associados em dois ou três. Somente uma mistura de três mAbs que se ligam a diferentes domínios da TeNT foi neutralizante, demonstrando a importância do sinergismo para a ação neutralizante.A fim de diminuir o uso de animais, alguns testes foram realizados como forma de tentar triar os anticorpos a serem testados in vivo. Porém, a execução dos testes foi limitada pela baixa concentração dos mAbs expressos e disponibilidade de TeNT, além de outras limitações dos ensaios.Devido à dificuldade em analisar um painel grande de anticorpos, decidimos nos dedicar à obtenção de uma linhagem permanente de expressão dos mAb que neutralizaram a toxina tetânica in vivo. Foi, então, encomendada a síntese de vetores já contendo sequências para a expressão das regiões constantes das cadeias pesada gama 1 e leve kappa humanas. Realizamos também a compra de vetores com as sequências otimizadas das regiões variáveis de dois mAbs para comparação com as sequências geradas no laboratório. Houve diferença entre a produtividade dos mAbs obtidos com sequências otimizadas e sequências originais. Porém, como esperado, a otimização das sequências não alterou a função dos mAbs
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- Data da defesa: 30.09.2021
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
TAKATA, Daniela Yumi. Expressão, caracterização e avaliação funcional de anticorpos humanos antitetânicos. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-28112022-103622/. Acesso em: 01 jun. 2024. -
APA
Takata, D. Y. (2021). Expressão, caracterização e avaliação funcional de anticorpos humanos antitetânicos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-28112022-103622/ -
NLM
Takata DY. Expressão, caracterização e avaliação funcional de anticorpos humanos antitetânicos [Internet]. 2021 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-28112022-103622/ -
Vancouver
Takata DY. Expressão, caracterização e avaliação funcional de anticorpos humanos antitetânicos [Internet]. 2021 ;[citado 2024 jun. 01 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-28112022-103622/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.87.2021.tde-28112022-103622 (Fonte: oaDOI API)
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